Фильтры для фш: Использование фильтров в Adobe Photoshop

Полезные фильтры для фотошопа, которые можно использовать бесплатно

Adobe Photoshop является мощным инструментом для редактирования фотографий, с множеством встроенных функций и эффектов. Но если вы являетесь маркетологом с небольшим опытом графического дизайна, работа в Photoshop может показаться вам сверхсложной задачей:

В то же время, если вы потратили годы на изучение Photoshop, может наступить момент, когда вы почувствуете, что исчерпали встроенные возможности программы.

В этой статье рассмотрены бесплатные фильтры для фотошопа, а также плагины для Adobe Photoshop, которые могут вам пригодиться. Для новичков они помогут упростить сложные процессы редактирования графики. Опытным пользователям Photoshop они помогут расширить набор доступных инструментов и развиваться в новых направлениях.

Приведенные ниже фильтры формально являются «действиями» Photoshop (файлы .ATN). Действия (экшены)- это предварительно записанная серия шагов, которая позволяет применять эффекты (в данном случае фильтры) автоматически.

Скачать фильтр >

Можно легко создать этот классический эффект красно-коричневой сепии вручную, перейдя в меню Изображение – Коррекция- Фотофильтр, а затем выбрав из выпадающего списка пункт «Сепия». Но если вам нужен фильтр сепии, то Dramatic Sepia от Efeito Photoshop вполне может подойти для этого:

Скачать фильтр >

Если, на ваш вкус, сепия — слишком сильный эффект, но вы хотите создать что-то ностальгическое, в стиле ретро, экшен Old Photo должно в этом помочь. Он корректирует цвет и контраст изображения:

Скачать фильтр >

Перед тем, как установить плагин в Фотошоп, нужно знать, что он применяет к изображению фильтр, который создает тонкую, подобную сновидению атмосферу. В частности, экшен создает по краям изображения темную размытую виньетку, одновременно повышая уровни насыщенности:

Скачать фильтр >

Экшен Vintage добавляет особый неоновый эффект, идеально подходящий для того, чтобы придать вашему проекту уникальный вид:

Скачать фильтр >

Имитирует винтажные изображения, создаваемые черно-белой литографией. Но по сравнению с другими винтажными фильтрами в этом списке, Lithprint гораздо более радикален. В дополнение к настройке контрастности, подсветки и теней он добавляет к изображению песчаную текстуру:

Скачать плагин >

Если вы хотите создавать в Photoshop уникальные эффекты (например, черно-белые, высоко контрастные, поляризованные и т. д.), этот плагин от OptikVerve Labs — то, что вы искали. Он позволяет добавлять сложные эффекты к изображениям одним кликом мыши:

Скачать плагин >

Бесплатный плагин для Фотошопа, который упрощает добавление сложных эффектов к изображениям. Он содержит библиотеку фильтров. В том числе виньетки, регулируемой контрастности и HDR-изображений, которые можно накладывать друг на друга и создавать слои с различными эффектами:

Скачать плагин >

Вам нужно отсортировать тысячи бесплатных иконок и добавить их в свои проекты, не выходя из Photoshop? Тогда Flaticon от Freepik определенно заслуживает вашего внимания. Иконки этого бесплатного плагина доступны в форматах . SVG, .PSD и .PNG:

Скачать плагин >

Бесплатный плагин для Фотошопа упрощает создание двух панельных, трех панельных и более чем четырех панельных проектов. Просто выберите количество строк и панелей, которое вам, а также тип выравнивания, и Tych Panel автоматически отформатирует все что нужно:

Вам известны еще какие-то бесплатные фильтры и плагины для Photoshop? Напишите об этом в комментариях.

Дайте знать, что вы думаете по этой теме материала в комментариях. Мы крайне благодарны вам за ваши комментарии, отклики, лайки, подписки, дизлайки!

Данная публикация является переводом статьи «9 of the Best Photoshop Filters & Plugins You Can Use for Free in 2017» , подготовленная редакцией проекта.

Как использовать смарт-фильтры в фотошопе

В этом уроке я покажу вам, как использовать интеллектуальные фильтры в Photoshop! Вы узнаете все, что вам нужно знать о интеллектуальных фильтрах, в том числе о том, что такое интеллектуальные фильтры, и о преимуществах, которые они имеют по сравнению с обычными фильтрами Photoshop. Вы узнаете, как применять и редактировать интеллектуальные фильтры, как добавлять несколько интеллектуальных фильтров к одному изображению, как контролировать, какие части вашего изображения влияют на интеллектуальные фильтры, и многое другое! Мы даже научимся применять самый мощный фильтр Photoshop, Camera Raw Filter, в качестве редактируемого неразрушающего интеллектуального фильтра! Я буду использовать Photoshop CC, но умные фильтры доступны в любой версии Photoshop от CS3 и выше. Давайте начнем!

Что такое умные фильтры?

Умный фильтр действительно просто обычный Photoshop фильтр, но один , который был применен в смарт — объект.

Смарт — объект представляет собой контейнер , который содержит содержимое слоя безопасно внутри него. Когда мы преобразуем слой в смарт-объект, любые сделанные нами изменения применяются к самому контейнеру, а не к его содержимому. Это сохраняет наши изменения как редактируемые, так и неразрушающие. И когда мы применяем один из фильтров Photoshop к смарт-объекту, этот фильтр автоматически становится редактируемым неразрушающим интеллектуальным фильтром!

Основным преимуществом интеллектуальных фильтров является то, что мы можем изменять настройки интеллектуального фильтра в любое время, когда это необходимо, без потери качества и без постоянных изменений изображения.

Но есть и другие преимущества. Мы можем включать и выключать интеллектуальные фильтры, изменять режим наложения и непрозрачность интеллектуального фильтра и даже изменять порядок применения интеллектуальных фильтров. Интеллектуальные фильтры также включают в себя встроенную маску слоя, которая позволяет нам точно определить, какая часть изображения подвергается воздействию. А поскольку интеллектуальные фильтры абсолютно неразрушающие, они дают нам свободу экспериментировать с различными фильтрами и настройками фильтров, не беспокоясь о том, что они могут что-то испортить. Правда в том, что если вы не используете интеллектуальные фильтры, вы упускаете одну из лучших функций Photoshop, поэтому давайте посмотрим, как они работают!

Как применить умный фильтр в Photoshop

Для этого урока я буду использовать изображение, которое я скачал с Adobe Stock. Поскольку наша цель — изучить интеллектуальные фильтры, а не создавать определенный эффект, вы можете легко следовать за любым собственным изображением:

Исходное изображение. Фото предоставлено: Adobe Stock.

Преобразование слоя в смарт-объект

Прежде чем мы сможем применить умные фильтры, нам сначала нужно преобразовать наше изображение в умный объект. На панели «Слои» мы видим изображение на фоновом слое :

Изображение открывается на фоновом слое.

Чтобы преобразовать слой в смарт-объект, дважды щелкните имя «Фон», чтобы переименовать его:

Начните с переименования фонового слоя.

В диалоговом окне «Новый слой» присвойте слою более информативное имя. Я назову мое «Фото». Нажмите OK, чтобы принять его:

Переименование фонового слоя.

Вернувшись на панель «Слои», мы видим, что мой фоновый слой теперь является слоем «Фото». Чтобы преобразовать его в смарт-объект, щелкните значок меню в правом верхнем углу панели «Слои»:

Нажав на значок меню панели «Слои».

Затем выберите « Преобразовать в смарт-объект» из списка:

Выбрав «Преобразовать в смарт-объект».

Значок смарт — объект появится в правом нижнем углу просмотра миниатюры слоя, говорит нам , что наш слой теперь смарт — объект:

Значок смарт-объекта.

Связанное учебное пособие: Как создавать смарт-объекты в Photoshop

Применение фильтра Photoshop в качестве интеллектуального фильтра

После того как мы преобразовали слой в смарт-объект, все фильтры, которые мы применяем к нему из меню «Фильтры» в Photoshop, будут автоматически преобразованы в смарт-фильтры. Например, давайте начнем с чего-то простого, например, фильтра Gaussian Blur. Перейдите в меню «

Фильтр» в строке меню, выберите « Размытие» , а затем выберите « Размытие по Гауссу» :

Идем в Filter> Blur> Gaussian Blur.

Мы можем использовать фильтр размытия по Гауссу, чтобы размыть изображение, и мы контролируем степень размытия, используя параметр « Радиус» в нижней части диалогового окна. Я установлю свой радиус в 10 пикселей:

Отрегулируйте степень размытия с помощью ползунка Радиус.

Нажмите OK, чтобы закрыть диалоговое окно, и вот мое изображение с примененным размытием:

Изображение после применения фильтра Gaussian Blur.

Просмотр умных фильтров

Если мы снова посмотрим на панель «Слои», то увидим, что наш фильтр размытия по Гауссу теперь указан как смарт-фильтр под смарт-объектом «Фото». Все, что нам нужно было сделать, это применить его к смарт-объекту, и Photoshop мгновенно преобразовал фильтр в интеллектуальный фильтр:

Смарт-фильтры перечислены ниже смарт-объекта, к которому они были применены.

Как редактировать смарт-фильтр

Основное преимущество интеллектуальных фильтров перед обычными фильтрами Photoshop заключается в том, что мы можем редактировать интеллектуальный фильтр и изменять его настройки после его применения. Чтобы изменить смарт-фильтр, дважды щелкните его имя:

Дважды щелкните смарт-фильтр, чтобы снова открыть его.

Это открывает диалоговое окно фильтра. Я увеличу значение Радиуса с 10 до 20 пикселей, а затем нажму OK:

Редактирование умного фильтра.

Мой новый параметр фильтра мгновенно применяется к изображению. А поскольку интеллектуальные фильтры неразрушающие, качество изображения не ухудшается. Новый параметр фильтра просто заменяет предыдущий параметр, как будто предыдущий никогда не встречался:

То же изображение после редактирования умного фильтра Gaussian Blur.

Изменение режима наложения смарт-фильтра и непрозрачности

Наряду с возможностью изменять их настройки, еще одним преимуществом интеллектуальных фильтров в Photoshop является то, что мы можем изменять режим наложения фильтра и непрозрачность . Если вы посмотрите справа от имени интеллектуального фильтра на панели «Слои», вы увидите значок с двумя ползунками. Это значок фильтра параметров наложения. Дважды щелкните по нему, чтобы открыть диалоговое окно Blending Options:

Каждый смарт-фильтр будет иметь свой собственный значок параметров наложения.

Здесь мы можем изменить режим наложения и прозрачность фильтра. Другими словами, мы меняем то, как эффект фильтра смешивается с содержимым его смарт-объекта. Это отличается от параметров «Режим наложения» и «Непрозрачность» на панели «Слои», которые управляют смешиванием слоя со слоями под ним. Здесь мы влияем на сам фильтр.

Я изменю режим наложения интеллектуального фильтра Gaussian Blur с Normal на Soft Light и уменьшу непрозрачность до 50% . Затем я нажму OK, чтобы закрыть диалоговое окно:

Изменение режима наложения и снижение непрозрачности интеллектуального фильтра.

Изменение режима наложения эффекта размытия на «Мягкий свет» повышает контрастность и насыщенность цвета изображения, создавая мягкое свечение. И уменьшив непрозрачность фильтра до 50 процентов, я уменьшил интенсивность эффекта:

Результат после изменения параметров наложения для интеллектуального фильтра Gaussian Blur.

Связанное руководство: Лучшие 5 режимов наложения Photoshop, которые вы должны знать

Включение и выключение интеллектуального фильтра

Еще одним преимуществом интеллектуальных фильтров является то, что мы можем включать и выключать их. Чтобы увидеть, как выглядело ваше изображение перед применением интеллектуального фильтра, отключите его, щелкнув

значок видимости рядом с его именем. Нажмите тот же значок видимости еще раз (пустое место, где появилось глазное яблоко), чтобы снова включить фильтр и просмотреть эффект:

Используйте значок видимости для включения и выключения интеллектуального фильтра.

Добавление более умных фильтров

Пока что мы применили один интеллектуальный фильтр, но мы можем добавить несколько интеллектуальных фильтров к одному и тому же интеллектуальному объекту. Давайте добавим второй, на этот раз из галереи фильтров Photoshop. Перейдите в меню « Фильтр» в строке меню и выберите « Галерея фильтров» :

Идем в Фильтр> Галерея фильтров.

Галерея фильтров открывается с большой областью предварительного просмотра слева, а фильтры, из которых мы можем выбрать, вместе с их настройками справа:

Фотошоп Фильтр Галерея.

Я выберу один из моих любимых фильтров, Diffuse Glow , который находится в группе фильтров Distort . Нажмите на его эскиз, чтобы выбрать его:

Выбор фильтра Diffuse Glow.

В настройках для фильтра Diffuse Glow, я задам зернистость до 3 , в Glow Amount до 5 и Clear Amount до 8 . Затем я нажму OK, чтобы закрыть галерею фильтров:

Настройки фильтра Diffuse Glow.

И вот мое изображение с применением Diffuse Glow:

Эффект с использованием умных фильтров Diffuse Glow и Gaussian Blur.

На панели «Слои» теперь мы видим два смарт-фильтра, перечисленных ниже смарт-объекта. Любые фильтры, которые являются частью галереи фильтров, перечислены просто как «Галерея фильтров», а не по имени определенного фильтра, который был использован:

Панель «Слои» показывает оба интеллектуальных фильтра.

Редактирование эффекта

Если бы я хотел попробовать другие настройки для фильтра Diffuse Glow, я мог бы дважды щелкнуть по имени «Галерея фильтров», чтобы снова открыть его и внести свои изменения. Но в этом случае я просто хочу уменьшить интенсивность эффекта, поэтому дважды щелкните значок фильтра « Параметры наложения»:

Открытие параметров наложения для галереи фильтров.

В диалоговом окне «Параметры наложения» я оставлю режим наложения «Нормальный», но уменьшу непрозрачность примерно до 80% . Тогда я нажму ОК:

Понижение непрозрачности фильтра Diffuse Glow.

С уменьшенной непрозрачностью эффект Diffuse Glow теперь немного менее интенсивен:

Результат после понижения непрозрачности.

Изменение порядка смарт-фильтров

Порядок, в котором мы применяем умные фильтры, важен, потому что Photoshop применяет их один за другим снизу вверх. В моем случае сначала применяется Gaussian Blur, а затем фильтр Diffuse Glow поверх эффекта размытия. Мы можем изменить порядок наложения интеллектуальных фильтров, перетаскивая их выше или ниже друг друга в списке. Я нажму на свой фильтр Gaussian Blur, а затем перетащу его над фильтром Diffuse Glow (Галерея фильтров). Когда над Галереей фильтров появится полоса выделения, я отпущу кнопку мыши, чтобы поместить Gaussian Blur на место:

Перетащите смарт-фильтры вверх или вниз, чтобы изменить порядок их применения.

И теперь сначала применяется фильтр Diffuse Glow, а затем Gaussian Blur:

Photoshop теперь применяет фильтры в обратном порядке.

Разница может быть тонкой или более очевидной в зависимости от используемых вами фильтров. В моем случае это незаметно, но заметно. В этом сравнении «до и после» мы видим, что перемещение фильтра Gaussian Blur над фильтром Diffuse Glow добавило немного больше яркости и контраста к эффекту (справа) по сравнению с тем, как он выглядел первоначально (слева):

Исходная (слева) и новая (справа) версия после изменения порядка смарт-фильтров.

Редактирование нескольких умных фильтров

Вот проблема, с которой вы столкнетесь при редактировании нескольких интеллектуальных фильтров. Теперь фильтр Gaussian Blur расположен над галереей фильтров, если я дважды щелкну на его имени, чтобы отредактировать фильтр:

Двойной щелчок на «Gaussian Blur».

Диалоговое окно Gaussian Blur открывается снова, как мы и ожидали. Я нажму « Отмена», чтобы закрыть его без каких-либо изменений:

Откроется диалоговое окно Gaussian Blur.

Но посмотрите, что произойдет, если дважды щелкнуть слова «Галерея фильтров» под фильтром размытия по Гауссу:

Двойное нажатие на «Фильтр Галерея».

Вместо того, чтобы открывать галерею фильтров, Photoshop вместо этого открывает сообщение. В сообщении говорится, что любые интеллектуальные фильтры, расположенные над этим фильтром, будут временно отключены, пока мы вносим изменения. Опять же, причина в том, что Photoshop применяет интеллектуальные фильтры снизу вверх. Поскольку мой фильтр размытия по Гауссу расположен над галереей фильтров, Photoshop должен отключить фильтр размытия по Гауссу, чтобы он мог отображать точный предварительный просмотр галереи фильтров. Когда я закончу вносить изменения и закрою галерею фильтров, Photoshop снова включит фильтр размытия по Гауссу. Когда вы увидите это сообщение, просто нажмите OK, чтобы принять его:

Любые интеллектуальные фильтры над выбранным фильтром не будут просматриваться, пока мы не закончим редактирование.

Как только я закрою сообщение, Галерея фильтров снова откроет мои настройки Diffuse Glow. Я снова нажму Отмена, чтобы закрыть его без внесения каких-либо изменений:

Нажмите кнопку ОК, чтобы закрыть сообщение и изменить смарт-фильтр.

Экспериментируя с умными фильтрами

Поскольку интеллектуальные фильтры абсолютно неразрушающие, мы можем спокойно поиграть и поэкспериментировать с различными фильтрами и настройками фильтров, просто чтобы посмотреть, что они делают, и посмотреть, понравится ли нам результат. Одним из фильтров, которые я использовал для своего эффекта «Падающий снег», был фильтр «Кристаллизация». Чтобы увидеть, как это выглядит с этим изображением, я выберу его, зайдя в меню « Фильтр» , выбрав Pixelate , а затем выбрав « Кристаллизация» :

Идем в Filter> Pixelate> Crystallize.

Фильтр Кристаллизация разбивает изображение на цветные участки или ячейки. Мы контролируем размер ячеек с помощью параметра Размер ячейки внизу. Так как я просто экспериментирую здесь, я установлю свой размер ячейки на 40, и затем я нажму OK:

Диалоговое окно Crystallize filter.

И вот результат. Это интересный эффект, и я уверен, что он найдет применение в будущем. Но для этого изображения это на самом деле не работает:

Эффект фильтра кристаллизации.

Как удалить смарт-фильтр

Если вы попробуете умный фильтр и вам не понравятся результаты, это не проблема. Вы можете просто удалить его. На панели «Слои» мы видим фильтр «Кристаллизация», который теперь указан как третий интеллектуальный фильтр над остальными:

К изображению теперь применены три интеллектуальных фильтра.

Чтобы удалить смарт-фильтр, щелкните его имя и перетащите его вниз в корзину в нижней части панели «Слои».

Перетащите смарт-фильтр на корзину, чтобы удалить его.

После удаления фильтра изображение мгновенно возвращается к тому, как оно выглядело до применения фильтра:

Эффект после удаления смарт-фильтра Crystallize.

Применение Camera Raw в качестве интеллектуального фильтра

Давайте добавим еще один умный фильтр. На этот раз мы добавим самый мощный фильтр во всем Photoshop, Camera Raw Filter. Обратите внимание, что фильтр Camera Raw доступен только в Photoshop CC, поэтому вам потребуется Photoshop CC, чтобы следовать этой части.

Перейдите в меню « Фильтр» и выберите « Camera Raw Filter» :

Собираюсь Filter> Camera Raw Filter.

Это открывает изображение в диалоговом окне Camera Raw Filter. Фильтр Camera Raw дает нам доступ к тем же функциям редактирования изображений, которые есть не только в основном плагине Camera Raw для Camera Raw, но и в Adobe Lightroom. А применяя его как интеллектуальный фильтр, мы сохраняем настройки фильтра полностью редактируемыми:

Диалоговое окно Camera Raw Filter.

На панели « Основные» справа я снизу значение « Ясность» до -25 . Это добавит немного большей мягкости к эффекту, уменьшив контраст в средних тонах. Затем, чтобы уменьшить насыщенность цвета, я уменьшу значение Vibrance также до -25 :

Понижение настроек Clarity и Vibrance на базовой панели.

Я нажму OK, чтобы закрыть диалоговое окно Camera Raw Filter, и вот результат:

Результат после смягчения изображения и снижения насыщенности цвета.

Редактирование настроек Camera Raw Filter

На панели «Слои» мы видим фильтр Camera Raw, указанный как интеллектуальный фильтр над галереей фильтров и фильтром размытия по Гауссу. Чтобы снова открыть его диалоговое окно и внести дополнительные изменения, просто дважды щелкните имя «Camera Raw Filter»:

Повторное открытие интеллектуального фильтра Camera Raw.

Я забыл, что я также хотел добавить эффект виньетки к изображению. Поэтому в области панели справа я переключусь на панель « Эффекты », щелкнув ее вкладку:

Переключение с базовой на панель эффектов.

Затем в разделе « Виньетирование после кадрирования » я перетащу ползунок « Количество» влево до значения около -30 :

Добавление виньетки к изображению.

Я еще раз нажму OK, чтобы закрыть диалоговое окно Camera Raw Filter. И вот результат, не только с настройками Clarity и Vibrance, которые я сделал изначально, но и с новым эффектом виньетки в углах:

Результат после внесения дополнительных изменений в Camera Raw Filter.

Использование маски слоя интеллектуального фильтра

И, наконец, еще одно большое преимущество интеллектуальных фильтров по сравнению с обычными фильтрами состоит в том, что интеллектуальные фильтры включают встроенную маску слоя . Маска слоя позволяет нам точно контролировать, какие части изображения затрагиваются фильтрами. На панели «Слои» мы видим миниатюру маски слоя, заполненную белым цветом, рядом со словами «Умные фильтры»:

Используйте маску слоя, чтобы контролировать видимость интеллектуальных фильтров.

Я хочу уменьшить яркость и восстановить некоторые детали на лице женщины, поэтому мне нужно уменьшить влияние интеллектуальных фильтров на эту часть изображения. Я могу сделать это, просто закрасив эту область на маске слоя черным. Сначала я нажму на миниатюру маски слоя, чтобы выбрать ее. Рамка выделения вокруг миниатюры говорит мне, что выбрана маска слоя, а не смарт-объект:

Выбор маски слоя.

Я выберу инструмент Brush Tool на панели инструментов:

Выбор Brush Tool.

И все же на панели инструментов я буду следить за тем, чтобы цвет моей кисти (цвет переднего плана) был черным :

Photoshop использует цвет переднего плана в качестве цвета кисти.

Затем, используя большую мягкую кисть, я нарисую маску слоя на лице женщины. Однако обратите внимание, что вместо того, чтобы просто уменьшить влияние интеллектуальных фильтров, я полностью их скрываю, а это не то, что я хотел сделать:

Рисование черным цветом на маске слоя скрывает эффекты интеллектуальных фильтров.

Рисование кистью с меньшей непрозрачностью

Я отменю свой мазок кисти, зайдя в меню « Правка» и выбрав « Отменить мазок кисти» :

Собираюсь Правка> Отменить мазок кисти.

Это восстанавливает умные фильтры в области, где я нарисовал:

Отмена хода кисти восстановила фильтры.

Затем в панели параметров я уменьшу непрозрачность моей кисти со 100% до примерно 40% :

Понижение непрозрачности кисти до 40%.

И на этот раз рисование в той же области с помощью кисти с меньшей непрозрачностью просто уменьшает, а не полностью скрывает эффекты интеллектуального фильтра:

Нарисуйте кистью с меньшей непрозрачностью, чтобы уменьшить, а не удалить эффекты интеллектуальных фильтров.

Связанное руководство: Как использовать маски слоев в Photoshop

Отображение и скрытие всех смарт-фильтров одновременно

Ранее мы узнали, что мы можем включать и выключать отдельный интеллектуальный фильтр, щелкая значок видимости рядом с именем фильтра. Но если вы применили несколько смарт-фильтров к смарт-объекту и хотите включить и отключить их все сразу, щелкните значок основной видимости рядом с миниатюрой маски слоя:

Используйте главный значок видимости для одновременного включения и выключения всех интеллектуальных фильтров.

Нажмите его один раз, чтобы отключить все смарт-фильтры и просмотреть исходное содержимое смарт-объекта:

Просмотр исходного изображения с отключенными интеллектуальными фильтрами.

Нажмите ее еще раз, чтобы снова включить интеллектуальные фильтры и просмотреть эффекты:

Эффект с включенными умными фильтрами.

И там у нас это есть! Это все, что вам нужно знать, чтобы начать использовать редактируемые неразрушающие смарт-фильтры в Photoshop! Для получения дополнительных уроков по интеллектуальным фильтрам, узнайте, как создать красочный художественный эффект вращения , как создать эффект акварельной живописи или как использовать интеллектуальные фильтры с текстом! Или посетите наш раздел Основы Photoshop для получения дополнительных уроков!

Adobe Photoshop.

Все фильтры (All Filters): Работа с геометрией. Часть 1Наконец-то я добрался до темы, которую давно хотел разобрать: фильтры Photoshop. А поскольку всего их 122, материал пришлось разбить на несколько занятий. В первый класс «Adobe Photoshop. Все фильтры (All Filters): Работа с геометрией» вошли сложные пять фильтров по работе с геометрией, стоящие особняком от всех остальных. Эта тема немного затрагивалась в одноименном классе, но он был рассчитан на новичков, поэтому разбирались только самые азы. А сейчас все подробно и с нюансами.

В этот выпуск попали:

• Adaptive Wide Angle (Адаптивный широкий угол)


• Camera Raw Filter (Фильтр Camera Raw)


• Lens Correction (Коррекция дисторсии)


• Liquify (Пластика)


• Vanishing Point (Исправление перспективы)

Как обычно, мастер-класс на liveclasses, до 20 мая цена класса 990 ₽ с промокодом FILTERS

Но есть и одни сюрприз. Однажды на фотокухне нам с Антоном Мартыновым задали вопрос: «Готовитесь ли вы к занятиям, или просто рассказываете все, что знаете?». Конечно, мы готовимся. И составляем для себя конспекты. И в этот раз конспект получился очень подробным, прежде всего потому, что я выписывал названия всех настроек на русском языке. И я подумал: а чего добру пропадать? Поэтому под катом конспект класса. Совершенно бесплатно. Только не думайте, что он сразу был таким красивым. У меня все было по-спартански, раза в два короче. Я его еще целый день до такого вида причесывал. В результате ЖЖ не смог уместить все в одной записи, поэтому здесь первая часть. Вторая лежит вот тут.

Организация работы с фильтрами

• Фильтры или «плагины» — это дополнительные программные модули, расширяющие функционал Photoshop


• Дополнительные панелек из меню Window > Extensions (Окно > Расширения) так же расширяют функционал программы


• Панельки используют в свей работе скрипты, задействующие штатный инструментарий программы


• Дополнительные панельки располагаются в папке Библиотеки > Application Support > Adobe >CEP > extensions (c:\Program Files (x86)\Common Files\Adobe\CEP\extensions)


• В отличии от панелек, фильтры — это отдельные самостоятельные программами, получающими исходную картинку из Photoshop и возвращающие обратно обработанный результат


• Разница между фильтрами и панельками


• Установка фильтров производится через меню PlugIns или вручную


• Команда PlugIns > Browse Plugins открывает раздел «Все плагины» в Creative Cloud и позволяет вести поиск новых плагинов в магазине Adobe


• Команда PlugIns > Manage Plugins открывает раздел «Управление плагинами» в Creative Cloud и позволяет устанавливать/ удалять имеющиеся плагины


• Панель Plugins — повторение двух предыдущих команд


• Установленные таким образом фильтры отображаются в самом низу списка в меню Filter (Фильтр) и отделены от основных фильтров чертой


• Ручная установка плагинов производится их переносом в папку Программы > Adobe Photoshop 2021 > Plug-Ins


• Установленные вручную фильтры отображаются в меню Filter (Фильтр) после основного списка фильтров, но перед фильтрами установленными через меню Plugins и отделены от них чертами


• Команда Filter > Convert  for Smart Filters (Фильтр > Преобразовать для смарт-фильтров) — конвертирует активный слой в смарт-объект


• К самрт-объекту фильтры применяются как смарт-фильтры, допускаю последующие изменения настроек


• Не все фильтры могут применяться как смарт-фильтры


• Команда Filter > Last Filter (Фильтр > Последний фильтр) после применения любого фильтра принимает его название и применяет его с такими же настройками, как при последнем применении


• При записи этой команды в экшен возникает возможность оперативно менять настройки фильтра при применении экшена без его редактирования


• Использование этой команды в экшенах для разложения на две полосы частот, позволяет оперативно менять не только настройки фильтра размытия, но и сам этот фильтр без редактирования экшена


• Такой принцип заложен в панельку ретуши Profile в кнопку Repeat Last Split

Adaptive Wide Angle (Адаптивный широкий угол)

• Фильтр Adaptive Wide Angle (Адаптивный широкий угол) предназначен для исправления искажений сверхширокоугольной оптики


• Кроме автоматического исправления искажений он позволяет указывать прямые, подлежащие выпрямлению


• Фильтр работает в отдельном интерфейсе, для завершения работы требуется нажать на кнопку «OK»

Слева вверху расположены ручные инструменты:

• Инструмент Constraint Tool (Ограничение) добавляет линии, подлежащие выпрямлению


• Инструмент Poligon Constraint Tool (Многоугольное ограничение) добавляет полигоны, каждая сторона которых подлежит выпрямлению


• Работа с полигонами менее удобна, поскольку линии предоставляют больше дополнительных настроек


• Инструмент Move Tool (Перемещение) перемещает картинку на холсте


• Данная функция очень полезна, когда из-за деформации значимая часть изображения оказывается за пределами холста


• Инструменты Hand Tool (Рука) и Zoom Tool (Масштаб) работают так же, как в Photoshop

Слева внизу находится информация о камере и объективе

• Данные из EXIF, используются при выборе профиля оптики для автоматических правок. Если поле пустое, значит эти данные в файле отсутствуют

Правее расположены три ключа:

• Ключ Preview (Просмотр) включает отображение производимых фильтром искажений


• ВНИМАНИЕ!!! Если картинка не реагирует на изменения настроек, убедитесь, что ключ Preview (Просмотр) активен!


• Ключ Show Constraints (Показать ограничения) включает отображение прямых линий и полигонов, подлежащих выпрямлению


• Ключ Show Mesh (Сетка) включает отображение сетки автоматичеких искажений

Справа от картинки расположены настройки Correction: (Исправление:)

• В них входит выбор типа искажений, подлежащих исправлению


• Режим Fisheye (Рыбий глаз) — предназначен для исправление искажений объектива fisheye


• Регулировка Scale (Масштабирование) изменяет размер картинки относительно холста


• Масштаб можно уменьшать на время работы для удобства настроек линий ограничения


• Регулировка Focal Length (Фокусное расстояние) задает фокусное расстояние объектива, искажения которого нужно исправить


• Чем меньше фокусное расстояние, тем сильнее (при прочих равных условиях) оптика искажала сцену и тем сильнее фильтр будет ее корректировать


• Регулировка Crop Factor (Коэффициент кадрирования) указывает размер матрицы фотоаппарата, искажения которого нужно скорректировать


• Чем больше кропфактор, тем меньше размер матрицы, следовательно, картинка забирается с меньшей области центральной части кадра


• Поскольку искажения в центре кадра меньше, увеличение кропфактора приводит к меньшей автоматической коррекции искажений


• Ключ As Shot (Как снято) возвращает все параметры к тем, которые указаны в метаданных снимка


• Линия ограничения строится при помощи клика в начальной и конечной точке


• Положение  линии ограничения относительно изображения меняется с помощью крайних точек


• В режиме Fisheye (Рыбий глаз) у линии ограничения можно подстраивать изгиб, перемещая центральную точку


• Линию ограничения можно довернуть, используя точки на пересечении линии и окружности


• При этом положение линии относительно картинки не меняется, таким образом картинка тянется за ней


• При зажатой клавише Shift линия ограничения встает в стандартные углы с шагом 15 градусов


• После поворота линия приобретает «Постоянную ориентацию» и отображается зеленым цветом


• Постоянная ориентация означает, что после перемещения линии относительно картинки за крайнюю точку она вернется к заданному углу наклона, потянув за собой изображение


• Переключение между линиями производится простым кликом по нужной линии


• Для удаления активной линии нужно нажать клавишу Del


• Для удаления любой линии нужно кликнуть по ней зажав клавишу Alt


• Будьте готовы к тому, что при сильных искажениях все линии одновременно не выпрямятся

• Режим Perspective (Перспектива) — предназначен для исправления трапециевидных искажений, возникающих при задирании объектива


• Чтобы получить строгую вертикаль или горизонталь при построении линии ограничений нужно зажать Shift


• Вертикальные линии будут отображаться пурпурным, горизонтальные желтым


• Окраску линий ограничения можно посмотреть и поменять в выпадающем меню Preferences (Настройки), расположенном справа от Correction: (Исправление:)


• Настройки Floating Loupe (Плавающая лупа) относятся к окну с увеличенным фрагментом изображения, появляющемся на месте курсора при манипуляциях с линиями ограничения


• Такой режим позволяет более точно позиционировать линии относительно картинки


• Команды Save Constraint (Сохранить ограничения) и Load Constraint (Загрузить ограничения) позволяют сохранить или загрузить схему деформации


• Загрузка схемы деформации возможна только при совпадении модели камеры, объектива и размера картинки с файлом, из которого она была сохранена

• Режим Auto (Авто) — система сама определяет, какой алгоритм правки применять


• Данный режим работает только при наличии информации о камере и объективе в метаданных


• Если вертикали в кадре прочитываются не очень четко, можно построить вертикальные линии с постоянной ориентацией, а потом перемещать их относительно картинки при помощи крайних точек, деформируя таким образом изображение и ориентируясь на его общий вид

• Режим Panorama (Панорама) — исправляет искажения в панорамах, собранных в фотошопе


• Данный режим появляется вместо Auto (Авто) только у картинок, которые опознаются фильтром, как панорамы, собранные в фотошопе


• В режимах Perspective (Перспектива), Auto (Авто) и Panorama (Панорама) подстройка центральной точки не допускается

• Режим Full Spherical (Полностью сферический) — исправляет искажения в панорамах на 360 градусов


• Чтобы избежать потери деталей из-за их выхода за пределы холста, перед применением фильтра холст можно наростить


• Фильтр адекватно работает даже после наращивания холста

Camera Raw Filter (Фильтр Camera Raw)

• Фильтр Camera Raw Filter (Фильтр Camera Raw) позволяет обрабатывает картинку в интерфейсе ACR, не заходя в него


• Может применяться как смарт-фильтр


• В отличии от реального ACR не содержит инструмента кадрирования и записи вариантов проявки (снэпшоты)


• В разделе Edit > Optics (Редактировать > Оптика) отсутствуют функции автоматического исправления дисторсии и хроматических аберраций в соответствии с профилем линзы


• В разделе Edit > Basic (Редактировать > Основные) параметры Temperature (Температура) и Tint (Оттенок) измеряются в условных единицах от нулевого значения, соответствующего начальному виду картинки


• С точки зрения проявки интересен тем, что содержит инструменты, отсутствующие в Photoshop


• При современном алгоритме конвертации даже в 8-битном изображении остается достаточно информации для активной работы с сильными настройками, например Dehaze (Удалить дымку)


• А вот старые внутрикамерные JPG при работе с аналогичными инструментами ждет постеризация


• Конечно, перепроявка исходного рава дает более качественный результат, чем применение Camera Raw Filter (Фильтр Camera Raw) к уже конвертированной картинке

• Раздел Edit > Geometry (Редактировать > Геометрия) позволяет быстро исправить перспективу с помощью функции Upright (Выпрямление)


• Off: (Нет:) — дополнительная коррекция выключена


• Auto: (Авто:) — применяется сбалансированная перспективная коррекция


• Level: (Уровневая:) — выравниваются только автоматически найденные на изображении горизонтали


• Vertical: (Вертикальная) — выравниваются только автоматически найденные на изображении вертикали


• Full: (Полная:) — выравниваются как автоматически найденные на изображении горизонтали, так вертикали


• Guided: (Направляющие:) — выравниваются указанные пользователем горизонтали и вертикали

• Manual Transformation (Коррекция вручную) оказывает дополнительное воздействие сверх функции Upright (Выпрямление)


• Ручная коррекция вертикальной перспективы позволяет избавиться от эффекта «снопа колосьев» после автоматической коррекции вертикалей


• Работа с выравниванием с помощью направляющих напоминает выравнивание неявных вертикалей с помощью фильтра Adaptive Wide Angle (Адаптивный широкий угол), описанную ранее


• Ручной сдвиг изображения вниз по холсту и его уменьшение позволяют спасти детали в верхней части снимка после автоматической коррекции вертикалей

Lens Correction (Коррекция дисторсии)

• Фильтр Lens Correction (Коррекция дисторсии) предназначен для исправления искажений оптики


• Кроме автоматического исправления искажений он позволяет вручную исправлять основные искажения, вносимые оптикой

Слева вверху расположены ручные инструменты:

• Инструмент Remove Distortion Tool (Удаление искажени) удаляет/добавляет дисторсию


• Его применение аналогично изменению регулировки Geometric Distortion (Геометрические искажения) в закладке Custom (Заказная)


• Инструмент Straighten Tool (Выпрямление) позволяет указать линию горизонта


• Его применение аналогично указанию соответствующей регулировки Angle: (Угол:) в закладке Custom (Заказная)


• Инструмент Move Grid Tool (Перемещение сетки) позволяет сдвинуть сетку вспомогательной разметки


• Инструменты Hand Tool (Рука) и Zoom Tool (Масштаб) работают так же, как в Photoshop

Слева внизу находится информация о камере и объективе

• Данные из EXIF, используются при выборе профиля для автоматических правок. Если поле пустое, значит эти данные отсутствуют

Правее расположены четыре настройки:

• Preview (Просмотр) включает отображение производимых фильтром искажений


• ВНИМАНИЕ!!! Если картинка не реагирует на изменения настроек, убедитесь, что ключ Preview (Просмотр) активен!


• Show Grid (Показать сетку) включает отображение сетки вспомогательной разметки


• Color: (Цвет:) позволяет изменить цвет сетки вспомогательной разметки


• Желательно не использовать для сетки яркие цвета чтобы не сбивать восприятие картинки


• Size: (Размер:) позволяет поменять размер ячеек сетки вспомогательной разметки

Справа от изображения находятся две закладки с основными настройками:

• В закладке Auto Correction (Автоматическая коррекция) выбираются коррекции на базе метаданных


• В разделе Lens Profiles (Профили объектива) предлагаются варианты профилей объективов наиболее подходящие под данные из EXIF


• При этом не всегда предложенные варианты точно соответствуют реальности


• Найти на винчестере  файл . icp с профилем линзы можно с помощью команды Show in Finder (Показать в Finder) из выпадающего меню раздела Lens Profiles (Профили объектива)


• Библиотека профилей линз используется из ACR


• Программа загрузчик профилей объективов Adobe с 01.01.2018 не поддерживается и недоступна для загрузки


• В разделе Search Criteria (Критерии поиска) происходит выбор критериев, по которым идет поиск профиля камеры и объектива из имеющейся библиотеки


• Практика показывает, если профиль не нашелся на автомате, лучше не тратить время на ручной выбор оптики, а сразу переходить к ручным коррекциям


• В разделе Correction (Коррекция) включаются автоматические коррекции


• Ключ Geometric Distortion (Геометрические искажения) включает устранение дисторсии


• Автоматическое устранение дисторсии работает хорошо


• Ключ Chromatic Aberration (Хроматическая аберрация) включает удаление хроматических аберраций


• Автоматическое удаление хроматических аберраций работает плохо, их лучше корректировать при проявке в ACR, или вручную в закладке Custom (Заказная)


• Из фильтра Camera Raw Filter (Фильтр Camera Raw) функция удаление хроматических аберраций исключена


• Ключ Vignette (Виньетка) включает удаление эффекта виньетирования


• Работает не очень хорошо, сильно высветляет края кадра, не допускает подстройки ширины зоны виньетирования и силы осветления


• Ключ Auto Scale Image (Автоматическое масштабирование изображения) включает автоматическое увеличение картинки после исправления геометрии, для удаления пустых участков


• В выпадающем меню Edge: (Край:) задается, что делать с пустыми зонами после исправления геометрии, если отключено автомасштабирование


• Edge Extension (Расширение краев) — крайний ряд пикселей растягивается до края картинки


• Transparency (Прозрачность) — пустые области остаются прозрачными


• Black Color (Черный цвет) — пустые области заливаются черным


• White Color (Белый цвет) — пустые области заливаются белым

• В закладке Custom (Заказная) находится набор дополнительных ручных регулировок


• В выпадающем меню Settings: (Настройки:) можно выбрать один из вариантов предустановок, включающих и настройки из закладки Auto Correction (Автоматическая коррекция)


• Lens Default (Объектив по умолчанию) — запомненный по умолчанию набор настроек


• Previous Correction (Предыдущее исправление) — набор настроек с последнего применения фильтра


• Custom (Заказная) — индивидуальный набор, на него система переключается при внесении любых изменений в настройки


• Default Correction (Коррекция по умолчанию) — набор с нулевыми настройками


• Справа от выпадающего  меню Settings: (Настройки:) находится выпадающее меню с функциями сохранения/загрузки/удаления пресетов и установки/сброса объектива по умолчанию


• В разделе Geometric Distortion (Геометрические искажения) настройка Remove Distortion (Удалить искажения) убирает или добавляет искажение «бочка-подушка»


• Данные искажения могут добавляться пользователем в творческих целях

• В разделе Chromatic Aberration (Хроматическая аберрация) настраивается дополнительное удаление хроматических аберраций по одному из каналов


• Хроматические аберрации появляются из-за разного коэффициента преломления для разных длин волн


• Из-за этого размер изображения в разных каналах получается немного разным и на контрастных границах картинка в одном из каналов «выползает» из под других, образуются цветные ореолы


• Поскольку в центре картинки в разных каналах совпадают, наиболее сильно аберрации проявляются на краях кадра


• Для удаления хроматических аберраций достаточно привести картинки к единому размеру


• Fix Red/Cyan Fringe (Красная/голубая кайма) — масштабирование красного канала относительно центра


• Fix Green/Magenta Fringe (Зеленая/пурпурная кайма) — масштабирование зеленого канала относительно центра


• Fix Blue/Yellow Fringe (Синяя/желтая кайма) — масштабирование красного канала относительно центра

• В разделе Vignette (Виньетка) настраивается добавление/удаление эффекта виньетирования


• Amount (Эффект) — сила затемнения или осветления краев кадра


• Midpoint (Средняя точка) — сдвиг зоны действия ближе/дальше относительно центра кадра


• Добавление виньетки в Lens Correction (Коррекция дисторсии) происходит более примитивно, чем в Camera Raw Filter (Фильтр Camera Raw), что приводит к излишнему затемнению светлых участков


• Как сымитировать виньетку вручную, посмотрим на следующем классе, посвященном применению режимов наложения

• В разделе Transform (Перспектива) производится исправление трапециевидных искажений, поворот и масштабировние изображения


• Vertical Perspective (По вертикали) — исправление вертикальных трапециевидных искажений


• Для адекватного вида изображения вертикальные линии должны быть не строго параллельными, а иметь небольшое схождение к верхней части кадра


• Horizontal Perspective (По горизонтали) — исправление горизонтальных трапециевидных искажений


• Мы привыкли к горизонтальной перспективе, поэтому ее исправление как правило не требуется


• Angle: (Угол:) — поворот картинки


• Scale (Масштаб) — масштабирование картинки


• Ручное масштабирование действует поверх автоматического масштабирования


• Для более точной настройки параметров можно вводить их значения в соответствующие цифровые поля

• По сравнению с Adaptive Wide Angle (Адаптивный широкий угол) получается более сильная и неестественная потяжка в верхней части кадра


• Кроме того Lens Correction (Коррекция дисторсии), в отличии от Adaptive Wide Angle (Адаптивный широкий угол) не позволяет сдвигать картинку по холсту, что может привести к потере значимых деталей


• Для сохранения верхней части снимка можно предварительно нарастить вверх холст


• Наглядно увидеть вносимые фильтром искажения можно применив его к кадру, предварительно залитому периодическим патерном

Продолжение здесь.

Работа с фильтрами — Учебный сайт по Adobe Photoshop

Приветствую, друзья! Сегодня у нас обзорный урок по фильтрам фотошопа. Вы узнаете, какие стандартные фильтры есть в фотошопе, для чего они нужны, и как их настроить. За эталон возьмём Photoshop CS5.

Сначала давайте определим, что представляют собой фильтры в фотошопе. Фильтр — инструмент для изменения изображения. Под изменением может пониматься размытие или усиление резкости, стилизация, усиление рельефа, изменение цветовой гаммы и многое, многое другое. Все фильтры представлены в соответствующем меню Filter:

Причём, обратите внимание, на представленном выше скриншоте красной рамкой отмечены стандартные фильтры, синей — скачанные и установленные дополнительно. Сегодня мы будем говорить только о стандартных фильтрах. Дополнительных же существует огромное множество. Некоторые из них платные, другие нет. Вскоре на нашем сайте откроется раздел, в котором я буду писать обзоры самых интересных фильтров и дополнений для фотошопа

Ну чтож, начнём!

Художественные фильтры фотошопа (Artistic Filters)

В этом разделе находится 15 фильтров:

Все фильтры этой группы призваны имитировать различные методы рисования. Нажмите на любой из этих фильтров, и появится окно подробной настройки:

В этом окне вы можете не только настроить выбранный фильтр, но и перейти к другому фильтру из текущей (или даже из другой) группы. Однако не все группы фильтров представлены в этом окне, некоторые имеют собственный интерфейс. Речь сейчас идёт о таких группах фильтров, как Blur (размытие), Noise (Шум), Pixelate (Пикселизация), Render (Визуализация), Sharpen (Резкость), Video (Видео) и Others (Другое).

А теперь поговорим о каждом фильтре в отдельности.

Colored Pencil (Цветной карандаш). Имитирует зарисовку цветным карандашом:

Слева вы видите изображение до применения фильтра, справа — после. Фильтр «цветной карандаш» имеет 3 параметра:

• Pencil Width (Толщина карандаша). Регулирует толщину штрихов.
• Stroke Width (Нажим штриха). Имитирует более сильное или слабое нажатие на карандаш.
• Paper Brightness (Яркость бумаги).

Cutout (Силуэт). Упрощает изображение до силуэтов:

Имеет следующие настройки:

• Number of Levels (Число уровней). Определяет насколько сложными будут силуэты.
• Edge Simplicity (Простота краёв). Регулирует детализацию краёв каждого силуэта.
• Edge Fidelity (Правильность краёв). Определяет, насколько точными должны быть края по сравнению с оригиналом. Чем меньше это значение, тем более условными будут края силуэтов.

Dry Brush (Сухая кисть). Имитация рисунка сухой кистью:

Здесь также всего 3 параметра настройки:

• Brush Size (Размер кисти).
• Brush Detail (Детали кисти). Определяет, сколько деталей нужно сохранить.
• Texture (Текстура). Настраивает выраженность текстуры бумаги.

Film Grain (Зернистость фотоплёнки). Накладывает на картинку зерно, которое появляется при видеосъёмке на плёночную камеру:

• Grain (Зерно). Количества зерна на изображении.
• Highlight Area (Зона яркости). Увеличивает яркость итогового изображения.
• Intensity (Интенсивность). Регулирует предыдущий параметр и задаёт интенсивность ярких зон.

Fresco (Фреска). «Закос» под фресковую живопись:

Настройки те же, что и у Dry Brush.

Neon Glow (Неоновое свечение). Создаёт неоновое свечение по контурам объектов на изображении.

• Glow Size (Размер свечения)
• Glow Brightness (Яркость свечения)

А также можно задать цвет неонового свечения.

Paint Daubs (Мазня краской). Создаёт эффект размазанной картины.

• Brush Size (Размер кисти). Уже знакомый нам параметр.
• Sharpness (Резкость).

А также можно задать тип кисти (Brush Type).

Palette knife (Шпатель). Имитация изображения, нанесённого шпателем.

• Stroke Size (Размер обводки). Регулирует размер обводки по краям контуров.
• Stroke Detail (Детализированность обводки).
• Softness (Мягкость). Сглаживает картинку.

Plastic Wrap (Полиэтиленовая обёртка). Создаёт ощущение, что картинку запихнули внутрь полиэтиленового пакета или плёнки.

• Highlight strength (Сила бликов). Определяет насколько сильно будет заметно полиэтиленовые блики.
• Detail (Детали). Уровень детализации контуров.
• Smoothness (Сглаживание). Насколько плавными будут блики.

Poster Edges (Очерченные края). Усиливает контуры картинки.

• Edge thickness (Толщина края).
• Edge intensity (Интенсивность края). Усиливает рельеф краёв.
• Poserization (Постеризация).

Rough Pastels (Пастель). Эффект рисунка пастелью.

Настроек здесь довольно много:

• Stroke Length (Длина штриха).
• Stroke Detail (Детализация штриха). Определяет, насколько сильно выраженными будут штрихи.
• Texture (Текстура). Позволяет выбрать из 4 текстур: кирпич (brick), burlap (мешковина), canvas (холст), sandstone (песчанник).
• Scaling (Масштаб).
• Relief (Рельеф).
• Light (Свет). Позволяет выбрать, с какой стороны будет освещён рельеф.

Галочка Invert инвертирует рельеф.

Smudge Stick (Растушевка). Эффект плавного, мягкого изображения.

• Stroke Length (Длина штриха).
• Highlight Area (Зона яркости).
• Intensity (Интенсивность).

Все эти параметры вам уже знакомы

Sponge (Губка). Эффект изображения, нанесённого на губку.

• Brush Size (Размер кисти).
• Definition (Чёткость).
• Smoothness (Сглаживание).

Underpainting (Рисование под поверхностью). Создаёт эффект рисунка под заданной поверхностью.

Настройки здесь те же самые, что и у Rough Pastels, за исключением Texture Coverage (Покрытие текстурой), который отвечает за степень покрытия изображения текстурой.

Watercolor (Акварель). Эффект рисунка, выполненного акварелью.

Все эти настройки нам уже знакомы.

На этом художественные фильтры кончились. Идём дальше!

Фильтры размытия в фотошопе

Это интересная и важная группа фильтров. Все они размывают изображение определённым способом. Скорее всего, вы довольно часто будете использовать фильтры этой группы, поэтому полезно знать, какой из них за что отвечает.

Average (Усреднение). Определяет средний цвет изображения или выделенной области и производит им заливку.

Blur (Размытие). Размывает изображение. Не имеет настроек.

Blur More (Размыть сильнее). Тоже самое, что Blur, только сильнее.

Box Blur (Кубическое размытие). Размывает ближайшие друг к другу пиксели (получается что изображение размывается как бы квадратами). Позволяет получать интересные эффекты. Хорош для создания плавных переходов и фонов.

Имеет один параметр — Radius, определяющий силу размытия:

Gaussian Blur (Размытие по Гауссу). Наиболее часто используемый тип размытия. В отличии от Box Blur размывает изображение плавно.

Также имеет только параметр Radius:

Lens Blur (Линзовое размытие). Пожалуй, самый интересный и гибко настраиваемый фильтр размытия в фотошопе. С его помощью можно имитировать глубину резкости (о том, как это сделать читайте в уроке «Глубина резкости«).

• Значение Source как раз задаёт источник, на основании которого будет выстроено действие фильтра. Это может быть плоскость, маска слоя и Depth Map (Карта глубины).
• Параметр Blur Focal Distance (Фокусное расстояние размытия) устанавливает силу размытия.
• Shape (Форма) задаёт форму линзы (от треугольной до восьмиугольной).
• Radius определяет радиус размытия.
• Blade Curvature (Изгиб лезвия) создаёт эффект раздвоения размытых объектов.
• Rotation разворачивает размытые пиксели.
• Specular Highlights (Отражающие свет) определяет с помощью значения Threshold (Выборка) количество пикселей отражающих свет. А значение Brightness задаёт яркость этого света.
• Noise добавляет шум.

Motion Blur (Размытие в движении). Как ясно из названия, создаёт эффект движения за счёт размытия картинки.

Здесь всего 2 параметра:

• Angle — угол, под которым изображение будет размываться.
• Distance (Дистанция). Собственно сила размытия.

Shape Blur. Размытие по заданной форме:

Выбираете форму и силу размытия.

Smart Blur (Умное размытие). Размывает только близкие по тону участки, оставляя резкие и контрастные переходы не тронутыми. Иногда неплохо справляется с маскировкой мелких дефектов кожи или других поверхностей.

• Radius. Сила размытия.
• Threshold (Выборка). Определяет область, которую требуется размыть. Чем больше это значение, тем более резкие области будут подвержены действию фильтра.
• Quality (Качество).
• Mode (Режим).

Surface Blur (Размытие по поверхности). Урезанный вариант Smart Blur’а.

Использование фильтров

Декоративные фильтры. Adobe Photoshop CS3

Декоративные фильтры

Как упоминалось, мы дадим краткий обзор декоративных фильтров Photoshop – лишь ту информацию, которая нужна для их самостоятельного освоения.

В меню Filter ? Artistic (Фильтр ? Художественный) собраны эффекты, имитирующие традиционные художественные техники рисования. Стоит предупредить, что имитация эта достаточно приблизительна и фильтры эти обычно используются как основа для дальнейшей работы по стилизации изображения.

Фильтр Colored Pencil (Цветной карандаш) имитирует рисование разноцветными карандашами. Он подчеркивает резкие цветовые границы на изображении и имитирует перекрестную штриховку на однотонных областях. Цвет фона, выбранный в момент применения фильтра, устанавливает цвет «бумаги», на которой «рисует» фильтр.

Фильтр Cutout (Вырезание) имитирует аппликации из цветной бумаги: изображение разбивается на однотонные области, а их границы упрощаются, как если бы каждый фрагмент изображения был вырезан ножницами из бумаги соответствующего цвета. Пример действия этого фильтра показан на рис. 18.21, слева.

Фильтр Dry Brush (Сухая кисть) имитирует рисование сухой кистью, при котором также нарушаются плавные цветовые переходы и проявляется своеобразный эффект постеризации.

Фильтр Film Grain (Зерно пленки) имитирует шум, характерный для кино– и фотопленки. Кроме того, этот фильтр может изменить яркость и цвета изображения, «подражая» переэкспонированной пленке.

Фильтр Fresco (Фреска), как видно из названия, имитирует рисунок красками на стене, с характерными для таких рисунков искажениями и погрешностями.

Фильтр Neon Glow (Неоновое свечение) имитирует неоновое или флуоресцентное свечение и применяется обычно к простым геометрическим формам, надписям – не к фотореалистичным изображениям. Цвет фона управляет тем, в какой цвет будет окрашено изображение, а силу и цвет свечения можно выбрать в самом фильтре.

Фильтр Paint Daubs (Мазки краски) имитирует неаккуратно, грубо нарисованную картину (если поработать над результатом эффекта вручную, то можно превратить ее в аккуратно нарисованную). Фильтр позволяет выбрать несколько вариантов кистей и их размер, которые определяют степень детализации рисунка.

Фильтр Palette Knife (Мастихин) берет свое название от инструмента мастихина – специального скребка для удаления красок с палитры. Существует и техника грубого, небрежного рисования, когда с помощью мастихина краска наносится на холст, – именно ее и пытается имитировать этот фильтр.

Фильтр Plastic Wrap (Пластиковая упаковка) имитирует рельефное изображение, обтянутое полиэтиленовой или другой пленкой, создавая на изображении блики, подчеркивающие его рельефность.

Фильтр Poster Edges (Постер), как и эффект постеризации, встречавшийся при рас смотрении коррекции изображений, уменьшает количество цветов, а в дополнение – отрисовывает черными линиями границы между цветами.

Фильтр Rough Pastels (Грубая пастель) имитирует рисование пастельными мелками по грубому холсту, что позволяет увидеть текстуру и рельеф холста.

Фильтр Smudge Stick (Смазывание) размывает и смазывает изображение, одновременно изменяя яркость отдельных его областей, имитируя поведение размазываемой и растираемой по холсту краски.

Фильтр Sponge (Губка) имитирует смачивание изображения влажной губкой, в результате чего краски меняют свой цвет и появляется специфический текстурный эффект.

Фильтр Underpainting (Эскиз) имитирует небрежный набросок красками на холсте с возможностью настроить силу текстурного рельефа холста и даже выбрать, какой фактурой будет обладать поверхность, на которой выполнен рисунок.

Фильтр Watercolor (Акварель) имитирует рисование акварельными красками, изменяя цветовую гамму изображения на значительно более темную в соответствии с законами смешивания акварельных красок. Пример обработки изображения этим фильтром можно увидеть на рис. 18.21, справа.

Рис. 18.21. Результат действия фильтров Cutout (Вырезание) (слева) и Watercolor (Акварель) (справа)

В меню Filter ? Brush Strokes (Фильтр ? Мазки кисти) собраны эффекты, имитирующие не технику рисования в целом, а всего лишь разные техники работы кистью. Эти эффекты часто используются в сочетании с фильтрами меню Filter ? Artistic (Фильтр ? Художественный) для достижения более реалистичного результата.

Фильтр Accented Edges (Акцентированные границы) позволяет подчеркнуть границы объектов на изображении, то есть резкие цветовые переходы. В зависимости от настроек, границы могут быть подчеркнуты разными оттенками – от черного до белого. Пример использования фильтра Accented Edges (Акцентированные границы) можно видеть на рис. 18.22, слева.

Фильтр Angled Strokes (Диагональные мазки) имитирует рисование кистью с прямыми, идущими под углом мазками. Светлые и темные цвета на изображении могут рисоваться под разными углами, что дает необычный эффект глубины.

Фильтр Crosshatch (Перекрестная штриховка) имитирует распространенную технику штриховки при работе с карандашами.

Фильтр Dark Strokes (Темные мазки), несмотря на свое название, создает как светлые, так и темные мазки поверх изображения, усиливая его контрастность.

Фильтр Ink Outlines (Чернильный абрис) прорисовывает линии по краям объектов на изображении, то есть по границам резких цветовых переходов.

Фильтр Spatter (Брызги) имитирует небрежное рисование краской, разбрызгиваемой с кисти, или с использованием специального распылителя – так называемой воздушной кисти. Пример применения фильтра можно видеть на рис. 18.22, справа.

Рис. 18.22. Результат действия фильтров Accented Edges (Акцентированные границы) (слева) и Spatter (Брызги) (справа)

Фильтр Sprayed Strokes (Мазки разбрызгивателя) также имитирует разновидность разбрызгивания краски, но теперь в движении – в настройках фильтра можно установить, под каким углом будут выполняться мазки и с какой силой.

Фильтр Sumi-e основан на одноименном японском стиле каллиграфического рисования суми-э и имитирует рисование кистью с большим количеством краски по тонкой рисовой бумаге.

Фильтры группы Filter ? Distort (Фильтр ? Искажение) искажают изображение – в первую очередь физически: искривляют его или еще каким-то образом нарушают взаимное расположение объектов на рисунке.

Фильтр Diffuse Glow (Диффузионное свечение) имитирует просмотр изображения через объектив с диффузионным фильтром. Цвет фона может использоваться для затенения изображения.

Фильтр Displace (Смещение) использует дополнительное изображение (небольшой черно-белый узор или текстурную карту), чтобы исказить рисунок и создать необычные эффекты – например, имитировать складки на ткани, на которой нарисовано изображение, и т. д.

Фильтр Glass (Стекло) имитирует преломление света при рассматривании изображения через неровное, фигурное стекло. Пример использования этого эффекта можно видеть на рис. 18.23, слева.

Фильтр Lens Correction (Коррекция линз объектива) изменяет изображение так, чтобы компенсировать искажения, допущенные при съемке, – перспективные искажения, виньетирование и цветовые нарушения (хроматическую аберрацию).

Фильтр Ocean Ripple (Океанские волны) имитирует искажения, подобные тому, как если бы мы смотрели на изображение под водой.

Фильтр Pinch (Сжатие) создает выпуклость или вогнутость на изображении, соответственно искажая его.

Фильтр Polar Coordinates (Полярные координаты) преобразует изображение из прямоугольных координат в полярные, и наоборот, – этот процесс часто используется профессионалами при разработке текстур для компьютерных игр и т. д.

Примечание

Примером изображения в прямоугольной системе координат может служить карта мира, а в полярной – карта одного из полушарий.

Фильтр Ripple (Рябь), подобно фильтру Ocean Ripple (Океанские волны), имитирует преломление изображения, находящегося под водой, однако его эффект более слабый и менее естественный.

Фильтр Shear (Сдвиг) искажает изображение, искривляя его вертикальную ось.

Фильтр Spherize (Размещение на сфере) искажает изображение, как будто оно было расположено на сферической поверхности.

Фильтр Twirl (Вращение) искажает изображение, «закрутив» его относительно центра.

Фильтр Wave (Волны) – как и фильтры Ocean Ripple (Океанские волны) и Ripple (Рябь) – имитирует преломление изображения при рассматривании сквозь неспокойную воду; однако большое количество настроек изображения позволяет создавать и абсолютно искусственные, неестественные эффекты искажения.

Фильтр ZigZag (Зигзаг) имитирует концентрические круги на воде – например, волны, разбегающиеся от брошенного в воду камня. Пример такого эффекта можно видеть на рис. 18.23, справа.

Рис. 18.23. Результат действия фильтров Glass (Стекло) (слева) и ZigZag (Зигзаг) (справа)

В подменю Filter ? Pixelate (Фильтр ? Разбиение на части) собраны эффекты, позволяющие различными способами «раздробить» изображение на части – по типу мозаики, растрирования или по другим законам.

Фильтр Color Halftone (Цветовые полутона) имитирует растрирование изображения при печати. С его помощью можно получить черно-белое или цветное изображение, отображаемое сильно увеличенным типографским растром, как то можно видеть на рис. 18.24, слева.

Фильтр Crystallize (Кристаллизация) превращает изображение в мозаику из однотонных многоугольников.

Фильтр Facet (Фасет) близок по действию к эффектам постеризации: близкие оттенки цвета заменяются одним оттенком, таким образом на изображении появляются области, окрашенные в один цвет, и заметные границы между ними. Этот эффект часто применяется как вспомогательный при имитации живописных техник, поскольку он позволяет избавиться от плавных переходов цвета в изображении.

Фильтр Fragment (Фрагментация) создает несколько копий изображения и смещает их друг относительно друга, достигая таким образом своеобразного эффекта преломления света.

Фильтр Mezzotint (Меццо-тинто) служит для имитации гравюрной техники под названием «меццо-тинто». В отличие от традиционных техник гравюры, полутона в меццо-тинто отображаются не с помощью волнистых линий разной толщины, а с помощью отдельных точек и черт.

Фильтр Mosaic (Мозаика) разбивает изображение на однотонные квадраты, как бы увеличенные пикселы (рис. 18.24, справа).

Рис. 18.24. Результат действия фильтров Color Halftone (Цветовые полутона) (слева) и Mosaic (Мозаика) (справа)

Фильтр Pointillize (Пуантилизация) имитирует технику рисования под названием «пуантилизм», когда изображение рисуется не широкими мазками, а отдельными точками-отпечатками кисти. Опять-таки эффект во многом похож на мозаику, поскольку при правильном исполнении возникает иллюзия цельного изображения.

Фильтры подменю Filter ? Render (Фильтр ? Просчитывание) создают какое-либо новое изображение на основе исходного изображения или независимо от него.

Фильтр Clouds (Облака) заменяет изображение на активном слое документа своеобразными «облаками», нарисованными случайным образом (рис. 18.25, слева). Такое случайное изображение часто берется за основу при создании текстур или узоров.

Фильтр Difference Clouds (Облака в режиме Difference) также создает рисунок «облаков», однако смешивает их с исходным изображением, используя режим наложения цвета Difference (Разность). Этот фильтр можно применить поверх облаков, созданных с помощью фильтра Clouds (Облака), чтобы усложнить создаваемую текстуру. Многократное применение фильтра Difference Clouds (Облака в режиме Difference) создает текстуры, которые схожи с узором мрамора.

Фильтр Fibers (Волокна) также создает случайное изображение, похожее на слой волокон (нитей, волос и т. д.), которое можно использовать при создании спецэффектов и текстур (рис. 18.25, справа).

Рис. 18.25. Результат действия фильтров Clouds (Облака) (слева) и Fibers (Волокна) (справа)

Фильтр Lens Flare (Блик в линзе) добавляет в изображение эффект «солнечного зайчика» в объективе фотоаппарата, который возникает при фотографировании против солнца.

Фильтр Lighting Effects (Световые эффекты) позволяет осветить изображение одним или несколькими источниками света и просчитать полученный результат, подобно тому как выглядит работа со светом в программах трехмерной компьютерной графики.

Фильтры подменю Filter ? Sketch (Фильтр ? Набросок) также имитируют техники рисования и некоторые другие изобразительные средства. Как видно из названия подменю, результат работы фильтров вряд ли будет точно соответствовать эффекту, но может быть взят за основу при дальнейшей работе.

Фильтр Bas Relief (Барельеф) позволяет создать рельефное изображение на основе рисунка – рельеф будет тем сильнее, чем резче цветовые переходы на изображении. Цвет фона используется в фильтре как цвет источника света, а цвет переднего плана – как цвет тени.

Фильтр Chalk & Charcoal (Мел и уголь) создает имитацию двухцветных изображений, нарисованных мелом и углем. Цвет «мела» определяется цветом переднего плана, а цвет «угля» – цветом фона; принимается за данность, что рисует фильтр по нейтрально-серой поверхности.

Фильтр Charcoal (Уголь) также имитирует рисование углем – однако результат получается более жестким, с меньшим количеством полутонов и более резкими границами. Цвет «угля» определяется цветом переднего плана, а цвет «бумаги», на которой выполнен рисунок, – цветом фона. Результат действия фильтра можно увидеть на рис. 18.26, слева.

Фильтр Chrome (Хром) превращает изображение в объемную хромированную поверхность и воспроизводит блики и переливы на блестящей поверхности.

Фильтр Conte ? Crayon (Восковые мелки) имитирует рисование черным и белым мелком (подобно использованию угля и мела) по холсту с возможностью настроить силу прорисовки текстуры холста.

Фильтр Graphic Pen (Авторучка) имитирует рисование шариковой или чернильной авторучкой, передавая полутона с помощью штриховки. Пример изображения, обработанного фильтром Graphic Pen (Авторучка), показан на рис. 18.26, справа.

Рис. 18.26. Результат действия фильтров Charcoal (Уголь) (слева) и Graphic Pen (Авторучка) (справа)

Фильтр Halftone Pattern (Полутоновой узор) позволяет наложить на изображение узор, дублирующий полутоновые переходы и оттенки. С помощью этого фильтра в зависимости от настроек можно имитировать печатный растр, низкокачественные мониторы и телевизоры и т. д.

Фильтр Note Paper (Бумага для записей) имитирует фоновый рисунок на бумаге (для осмысленного изображения) или же фактуру бумаги, сделанной вручную (для хаотичной текстуры).

Фильтр Photocopy (Фотокопия) имитирует снятие фотокопии (ксерокопирование) на низкокачественном оборудовании, когда в изображении пропадают полутона, а большие темные участки осветляются.

Фильтр Plaster (Гипс) имитирует рельефную лепку из гипса на основе изображения, которая освещается и окрашивается в цвета переднего и заднего плана.

Фильтр Reticulation (Ретикуляция) имитирует проявку кино– или фотопленки в старом или горячем растворе, при котором происходят своеобразные изменения структуры пленки и как следствие – высокая зернистость изображения.

Фильтр Stamp (Печать) имитирует созданную на основе изображения резиновую печать или штамп, упрощая изображение и удаляя полутона.

Фильтр Torn Edges (Рваные края) имитирует двухцветную аппликацию из бумаги с неаккуратно оборванными, а не обрезанными краями.

Фильтр Water Paper (Мокрая бумага) имитирует рисование красками (например, акварелью) по мокрой бумаге, причем цвета расплываются и детали изображения скрадываются.

Фильтры в подменю Filter ? Stylize (Фильтр ? Стилизация) создают несложные эффекты, которые можно использовать как основу для необычных эффектов.

Фильтр Diffuse (Диффузия) размывает изображение, перемешивая соседние пикселы между собой (меняя их местами, но не смешивая их цвета).

Фильтр Emboss (Объем) создает на основе изображения объемное, рельефное изображение на фольге или другом подобном материале.

Фильтр Extrude (Выдавливание) разбивает изображение на отдельные «трехмерные» блоки, которые смещаются по высоте и образуют объемный эффект (рис. 18.27, слева).

Фильтр Find Edges (Найти границы) удаляет исходное изображение и прорисовывает на его месте границы резких цветовых переходов. Этот фильтр используется только в технических целях.

Фильтр Glowing Edges (Светящиеся границы) подобен фильтру Find Edges (Найти границы), но может быть настроен так, чтобы прорисовать только значимые контуры изображения.

Фильтр Solarize (Соляризация) имитирует засветку фотобумаги при проявке, при которой происходит частичная инверсия цветов и возникают необычные цветовые эффекты.

Фильтр Tiles (Плитки) разбивает изображение на отдельные фрагменты (подобно рисунку на плитках кафеля) и затем смещает их относительно друг друга, заполняя промежутки цветом фона (рис. 18.27, справа).

Рис. 18.27. Результат действия фильтров Extrude (Выдавливание) (слева) и Tiles (Плитки) (справа)

Фильтр Trace Contour (Нахождение контура) позволяет прорисовать границы изображения с возможностью установки цветовой чувствительности.

Фильтр Wind (Ветер) смазывает изображение подобно работе с инструментом Smudge (Смазывание).

Фильтры, собранные в подменю Filter ? Texture (Фильтр ? Текстурирование), создают эффекты рельефа и текстуры поверхности.

Фильтр Craquelure (Трещины) имитирует рисунок на потрескавшейся штукатурке (рис. 18.28, слева).

Фильтр Grain (Зерно) добавляет в изображение различные виды шума для создания всевозможных эффектов – от имитации зернистости пленки и состаривания изображения до воссоздания фактуры различных поверхностей.

Фильтр Mosaic Tiles (Фрагменты мозаики) разбивает изображение на неправильной формы фрагменты мозаики.

Фильтр Patchwork (Мозаика) разбивает изображение на одноцветные квадратные плитки мозаики с эффектом объема.

Фильтр Texturizer (Текстуризатор) позволяет применить к изображению рельефную текстуру для имитации поверхности или фактуры материала, на котором выполнен рисунок.

Фильтр Stained Glass (Витраж) превращает изображение в имитацию средневекового витража, составленного из кусков цветного стекла (рис. 18.28, справа).

Рис. 18.28. Результат действия фильтров Craquelure (Трещины) (слева) и Stained Glass (Витраж) (справа)

Остальные фильтры в подменю Filter ? Video (Фильтр ? Видео) и Filter ? Other (Фильтр ? Другие) используются только в технических целях и не представляют интереса для обычного пользователя Adobe Photoshop.

Еще раз напомним, что многие эффекты Adobe Photoshop не предназначены для использования «сами по себе», а применяются как одна из стадий при создании сложного спецэффекта. В особенности это касается фильтров подменю Artistic (Художественный) и Brush Strokes (Мазки кисти), которые не в состоянии сами воспроизвести какую-либо технику рисования, но могут быть использованы как часть процесса при ее имитации.

К сожалению, как объем книги, так и объем видеокурса не позволяют нам рассмотреть все декоративные фильтры Photoshop, однако увидеть часть из них в работе и познакомиться с общими принципами обработки изображений с помощью фильтров можно в видеоуроке «Декоративные фильтры Adobe Photoshop».

Данный текст является ознакомительным фрагментом.

Продолжение на ЛитРес

Новые фильтры Photoshop на базе ИИ имеют функцию редактирования эмоций

Adobe расширила возможности программного обеспечения для редактирования изображений Photoshop. Компания добавила в программу улучшенный ИИ, включив в него функции мгновенной замены неба, несколько обновлений инструментов и раннюю версию нейронных фильтров для изменения эмоций лица.

Бета-версия интеллектуальных фильтров позволяет использовать ползунки для изменения степени счастья, удивления или гнева на лице, а также для изменения угла наклона головы, возраста человека и направления взгляда. Однако результаты могут выглядеть странно, если попробовать использовать сразу все возможности.

Настройка эмоции счастье. Фото: newatlas.com

Все это было выпущено в обновлении для подписчиков Creative Cloud. Вероятно, наиболее полезными для опытных редакторов изображений будут новые инструменты выделения, которые используют алгоритмы Adobe Sensei AI для улучшения способности программного обеспечения быстро рисовать линии выделения вокруг сложных объектов. В частности, это может пригодится для выделения волос, сложного фона и объектов, которые сливаются с фоном.

Замена неба — еще одна новая функция, которая заменяет небо на исходном изображении и добавляет фон из пары десятков стандартных альтернатив — или позволяет пользователю загрузить собственную замену. Функция также изменяет цвета остальной части изображения в соответствии с новым фоном. Этот инструмент создает отдельные слои для новых изображений неба, которые можно редактировать отдельно, чтобы позже добавить размытие и другие эффекты.

Новый Photoshop открывает доступ к галерее «нейронных фильтров», которые добавляют новые возможности обработки портретов. Здесь есть инструмент для сглаживания кожи, функция раскраски черно-белых снимков, усилитель разрешения суперзума, инструмент для переноса макияжа, эффект объемной дымки и умный портрет.

Последняя функция позволяет настраивать ползунки чтобы изменить уровень счастья, гнева, удивления, возраст, объем волос, направление взгляда, угол головы и направление света на лице человека на фотографии.

Система работает отлажено и может выдавать результаты за минуты (зависит от мощности устройства). Однако если наложить слишком много фильтров, ИИ может радикально изменить вид человека, его черты лица, стрижку и даже зубы.

Замена неба. Фото: newatlas.com

Некоторых функций явно не хватает в наборе инструментов. Например, автоматическое улучшение глаз, удаление мешков под глазами, отбеливание зубов в сочетании с более продвинутым инструментом для разглаживания кожи и удаления морщин. Бета-версия и функциональность, несомненно, будет продолжать развиваться по мере усовершенствования и расширения ИИ Adobe.

Обзор всех новых функций Photoshop и интеллектуального портрета, доступен в видео ниже (на английском языке).

Источник

Как применить смарт-фильтр к нескольким слоям в Photoshop

Каждая красивая

Эффект Adobe Photoshop является результатом редактирования магии на нескольких слоях. Слои, как простые прозрачные листы, могут быть перемешаны и сформированы вместе. Но знаете ли вы, что вы можете использовать умный фильтр вместо обычного фильтра на нескольких слоях для еще более интересных эффектов?

обычный фильтр постоянно изменяет пиксели в слое. умный фильтр применяет эффект фильтра к слоям неразрушающим способом. Это огромный шаг к экономии времени. Давайте посмотрим, как вы можете использовать интеллектуальный фильтр на нескольких слоях и сохранить возможность вносить изменения в любое время.

Как применить смарт-фильтр к нескольким слоям в Photoshop

1. Перейдите на панель «Слои» и выберите все слои, к которым вы хотите применить фильтр.
   
2. Идти к Фильтр в меню. Вы заметите, что ни один из фильтров не доступен для вас, кроме одного. выберите Конвертировать для смарт-фильтров.
   
3. Фотошоп скажет вам, что смарт-фильтры доступны для редактирования и слои станут умным объектом. Нажмите Хорошо и выберите любой фильтр. Например, я выбрал «Масляная краска» из галереи фильтров.
   
4. Если вам нужно что-то изменить в одном из слоев до или после применения фильтра, нажмите на эскиз слоя смарт-объекта. Группа изображений открывается во втором окне. Каждое изображение возвращается в своем собственном слое.
   
5. Выберите слой, который вы хотите редактировать. Нажмите Ctrl + S (Windows) или Command + S (Mac), чтобы сохранить изменения. Закройте второе окно. Вы заметите, что смарт-объект в первом окне был обновлен с вашими изменениями.

Интеллектуальный фильтр позволяет применять фильтр за один шаг, как будто все выбранные слои сглаживаются. Интеллектуальный фильтр рассматривает сгруппированные фотографии как одно изображение и соответственно применяет фильтр к пикселям.

Умные фильтры неразрушающие. Вы можете настроить, удалить или скрыть Smart Filter в любое время. Но Adobe действительно говорит это:

«Вы можете применить любой фильтр Photoshop (который был включен для работы со смарт-фильтрами), за исключением размытия объектива, рамки изображения пламени, деревьев и точки схода, в качестве интеллектуального фильтра. Кроме того, вы можете применять Shadow / Highlight в качестве Smart Filters ».

Умные фильтры действительно простые, но мощные. Вы можете изменить режимы наложения, использовать маски фильтров или просто настроить параметры фильтра для получения крутых эффектов. И вы не потеряете ни одного пикселя!

Какой ваш любимый способ использовать умные фильтры?

Кредит изображения: Yaruta / Depositphotos

Введение рекомбинантного фолликулостимулирующего гормона человека увеличивает выработку тестостерона у мужчин, возможно, за счет нестероидного фактора, секретируемого клетками Сертоли

Ранее мы показали, что рекомбинантный человеческий ФСГ (R-FSH) у мужчин увеличивает концентрацию тестостерона (T) в венозной крови (SB) сперматозоидов. Чтобы изучить влияние R-FSH на уровни семенных стероидов и действие SB без стероидов и LH на изолированные клетки Лейдига, во время операции на семенном канатике были изучены девять нормоспермических мужчин.Образцы периферической крови и SB были собраны до и через 30 минут после в / в введения 150 U R-FSH для измерения LH, FSH, T, эстрадиола, 17-альфа-гидроксипрогестерона и глобулина, связывающего половые гормоны, а также SB, андростендиона (дельта4) и дегидроэпиандростерон (DHEA) также измеряли. Биоактивность ЛГ оценивали по продукции Т in vitro в изолированных клетках Лейдига. Действие R-FSH и SB (без стероидов и LH) анализировали в биопробе. Данные выражены в виде среднего значения +/- SE. ФСГ в периферической крови и SB увеличились на 411% и 477% после введения R-FSH.R-ФСГ вызывал значительное повышение уровня тестостерона в сперматозоидах (базальный по сравнению с 30 мин, 326,4 +/- 98,5 по сравнению с 732,4 +/- 152,8 нг / мл; P <0,047) и эстрадиола в сперматозоидах (289,5 +/- 66,9 по сравнению с 535,6. +/- 83,4 пг / мл; P <0,036). Отношение T / delta4 (36,9 +/- 9,2 против 74,5 +/- 13,3; P <0,019) и отношение T / DHEA (10,8 +/- 1,1 против 22,4 +/- 4,9; P <0,024) значительно увеличились. В изолированных клетках Лейдига R-FSH не изменял продукцию T, но SB (не содержащий стероидов и LH) после введения R-FSH индуцировал увеличение продукции T (3.3 +/- 0,6 против 4,9 +/- 0,6 нг / тюбик; P <0,04). LH-подобная активность была обнаружена во фракции более 50 000 Да после центрифугирования на фильтрах Amicon, даже в присутствии анти-LH. Эти результаты предполагают, что R-FSH увеличивает продукцию T клетками Лейдига посредством высвобождаемого клетками Сертоли нестероидного фактора с молекулярной массой более 50 кДа. Увеличение соотношений Т / дельта4 и Т / ДГЭА указывает на то, что этот фактор будет действовать путем усиления ответа ЛГ через путь дельта5 и фермент 17бета-гидроксистероид дегидрогеназа.

Аномально повышенный уровень фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) у женщины с бесплодием

Мы сообщаем о случае 33-летней женщины с 4-летним первичным бесплодием. Высокий уровень изолированного фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) противоречил клинической ситуации и другим гормональным маркерам, свидетельствовавшим о синдроме поликистозных яичников. Мы следовали стратегии, используемой для идентификации иммунных комплексов с участием ФСГ. Тест преципитации ПЭГ показал, что высокий уровень ФСГ был почти исключительно результатом присутствия аутоиммунного комплекса иммуноглобулина ФСГ (макро-ФСГ).Профиль, полученный с помощью гель-фильтрационной хроматографии, подтвердил присутствие комплекса ФСГ-иммуноглобулин. Такое иммунологическое нарушение регуляции может быть исследовано в случаях необъяснимого бесплодия и рецидивирующей неудачи ЭКО.

1. Введение

Гонадотропины, лютеинизирующий гормон (ЛГ) и фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) являются ключевыми регуляторами функций гонад. Измерение ЛГ и ФСГ на 3-й день спонтанного менструального цикла, связанное с измерениями E2 и AMH, важно для оценки резерва яичников с целью персонализации протокола стимуляции яичников у женщин, подвергающихся экстракорпоральному оплодотворению (ЭКО) [1].Примерно 10–20% пар, которые не могут зачать ребенка, имеют необъяснимое бесплодие с неудачей ЭКО [2]. В этих случаях аутоиммунные механизмы и выработка аутоантител могут способствовать необъяснимому бесплодию. Повышенные уровни ФСГ на третий день обычно наблюдаются при преждевременной недостаточности яичников (ПНЯ) или опухолях, секретирующих гонадотропин. Если уровни ФСГ или ЛГ не соответствуют клинической ситуации, наличие антигонадотропинов следует оценивать гормональным измерением после преципитации ПЭГ и дополнительно подтверждать хроматографией [3, 4].Эта стратегия и процедуры эквивалентны той, что используется для обнаружения макропролактина [4, 5].

2. Описание случая

33-летняя женщина была направлена ​​вместе со своим мужем в отделение репродуктивной медицины по поводу 4-летнего первичного бесплодия. У обоих партнеров не было особого медицинского или хирургического анамнеза, и физикальное обследование не отличалось. Что касается мужчин, анализ спермы был совершенно нормальным. У женщин половое созревание началось в 10 лет, а менархе — в 16 лет.С тех пор эта женщина описала серьезные нарушения менструального цикла, такие как спаниоменорея или даже аменорея. Количество антральных фолликулов (AFC) было высоким (приблизительно 40), что убедительно свидетельствует о синдроме поликистозных яичников (СПКЯ) в соответствии с критериями Роттердама [6]. Общие выполненные гормональные анализы суммированы в таблице 1. Первоначальные тесты функции щитовидной железы выявили высокий уровень тиреотропного гормона (ТТГ) и нормальный уровень свободного тироксина (T4L). Антитела против тиреоглобулина (ААТ) были строго положительными.Было обнаружено, что эстрадиол (E2) и тестостерон в сыворотке находятся в пределах нормы. Уровень лютеинизирующего гормона (ЛГ) был умеренно повышен. Уровень антимюллерова гормона (АМГ) в сыворотке был очень высоким, что согласуется с диагнозом СПКЯ [7]. Был обнаружен чрезвычайно высокий уровень фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) (112 МЕ / л, нормальный диапазон 1,5–13 МЕ / л), что было подтверждено в следующих менструальных циклах с таким же очень повышенным значением ФСГ. Магнитно-резонансная томография (МРТ) гипофиза оказалась нормальной.Этот очень изолированный уровень ФСГ противоречил клинической ситуации и другим гормональным маркерам, которые свидетельствовали в пользу СПКЯ.

Гормональные анализы Метод Пациент Нормальный диапазон значений (а) День 3 нестимулированного цикла ЛГ (МЕ / L) Elecsys® LH 18,6 2–11 FSH (МЕ / л) Elecsys® FSH 112 1.5–13 E2 (пг / мл) Цисбиоэстрадиол 64,3 12–166 (пмоль / л) радиоиммуноанализ 236 44–609,2 ХГЧ (МЕ / л) Elecsys® hCG + β <0,5 <5 AMH Immunotech (нг / мл) фермент 9,4 2– 6 (пмоль / л) Иммуноанализ 67.1 14,3–42,8 ТТГ (мМЕ / л) Elecsys® TSH 6,85 0,2–4 T4L (нг / л) Elecsys® T4L 15,1 8,5 –18 (пмоль / л) 19,5 11–23,2 α -убъединица (МЕ / л) Радиоиммуноанализ 0,19 0,02–0,90 AAT (Ед / мл) Liaison® Anti-Tg 985 <100 Anti-ovarian Ab Непрямая иммунофлуоресценция Neg Neg Тестостерон (нг / мл) Cisbio Радиоиммуноанализ тестостерона 0.16 0,1–0,75 (нмоль / л) 0,55 0,34–2,60 (б) После осаждения полиэтиленгликоля LH (МЕ / л) Elecsys® LH 18,6 2–11 ПЭГ без осаждения ЛГ (МЕ / л) 8,4 / Восстановление ЛГ% 45,2 > 40 FSH (МЕ / л) Elecsys® FSH 112 1.5–13 ПЭГ неосаждаемый ФСГ (МЕ / л) 13,6 / Восстановление ФСГ% 12,1 > 40

Для У этого пациента вмешательство в анализ было заподозрено на основании несоответствия между результатами сывороточного ФСГ и ЛГ и историей болезни. Помехи в иммуноанализе редки, но очень проблематичны, поскольку могут сильно повлиять на ведение пациента.В этой ситуации можно идентифицировать эндогенные иммуноглобулины. Иммуноглобулины могут быть направлены против реагентов для анализа или против самого аналита, что приводит к образованию макроаналита, соответствующего комплексу иммуноглобулин-аналит. Мешающие иммуноглобулины могут быть идентифицированы путем удаления с преципитацией полиэтиленгликоля и специфической идентификации. Таким образом, анализ аналита проводится до и после лечения. Если присутствует мешающий иммуноглобулин, восстановление анализируемого вещества снижается.Заподозрить наличие макроаналита можно, если выход других аналитов нормальный (> 40%) [4].

В эндокринологии макро-гормон часто используется для анализа сывороточного пролактина. Если есть подозрение на макропролактин, преципитацию ПЭГ используют для выявления иммуноглобулиновой интерференции [8]. Макропролактин биологически неактивен, но его присутствие выявляется всеми иммуноанализами на пролактин и может привести к ошибочному диагнозу. Сотрудничество между клиницистом и биологом может позволить заподозрить интерференционные тесты.

Поскольку этот необъяснимый изолированный высокий уровень ФСГ напоминал случаи макропролактина, мы следовали той же стратегии, чтобы идентифицировать иммунные комплексы с участием ФСГ. Поэтому мы измерили ФСГ после преципитации полиэтиленгликолем (ПЭГ), чтобы выявить влияние аутоиммунного комплекса иммуноглобулина ФСГ (макро-ФСГ). Для этого метода 200 мкл л раствора ПЭГ 6000 (25%) смешивали с 200 мкл л образца, кратковременно перемешивали на вортексе и центрифугировали в течение 15 мин при 3000 g при комнатной температуре.Затем в супернатанте измеряли ФСГ для расчета извлечения. Мы использовали тот же протокол для оценки анализов ЛГ до и после преципитации ПЭГ. Скорость восстановления ФСГ составляла 12,1%, а уровень свободного ФСГ (непреципитированного ФСГ) после обработки ПЭГ находился на верхнем пределе нормального диапазона (Таблица 1). Анализы на ЛГ также проводились до и после осаждения ПЭГ. В отличие от ФСГ, восстановление ЛГ после осаждения ПЭГ было в пределах нормы (> 40%). Не было обнаружено аутоиммунного комплекса иммуноглобулина ЛГ, макро-ЛГ.Этот тест преципитации ПЭГ показал, что высокий уровень ФСГ у этого пациента был почти исключительно из-за присутствия высокомолекулярной формы ФСГ, макро-ФСГ. Затем проводили анализ циркулирующего ФСГ с помощью гель-фильтрационной хроматографии с использованием колонки Ultrogel® AcA 54. На колонку наносили сыворотку и фракции собирали для определения ФСГ.

Профиль гель-фильтрации у этого пациента представлен на Рисунке 1 (а). Обнаружена высокомолекулярная форма иммунореактивности ФСГ.Этот профиль элюции значительно отличался от образца, полученного у нормального контрольного субъекта (рис. 1 (b)). Пик с высокой молекулярной массой соответствует молекулярной массе комплекса ФСГ-иммуноглобулин. Был проведен дополнительный анализ. Сыворотка была проверена на аутоантитела яичников с помощью непрямого иммунофлуоресцентного анализа, но результат был отрицательным. ФСГ состоит из двух пептидных субъединиц: альфа, общего с ЛГ, ТТГ и ХГЧ (хорионический гонадотропин человека), и бета, которая определяет гормональную специфичность.Мы хотели оценить, были ли анти-ФСГ направлены против субъединицы α или β . Были реализованы анализ α -субъединицы и тест ХГЧ с помощью анализа, специфичного для β -субъединицы (таблица 1). Нормальные результаты показали, что эти аутоантитела против ФСГ, вероятно, были направлены против β -субъединицы ФСГ.

3. Обсуждение

Мы описываем здесь случай аутоантител против ФСГ, приводящих к сохранению очень высоких уровней ФСГ в сыворотке крови у бесплодной женщины.Наряду с ЛГ, ФСГ является ключевым регулятором функций гонад. Он синтезируется и высвобождается из передней доли гипофиза в виде гетеродимерного гликопротеина с молекулярной массой ~ 30 кДа. Он состоит из двух пептидных субъединиц: альфа, общего с ЛГ, ТТГ и ХГЧ, и бета, определяющего гормональную специфичность. Измерение ЛГ и ФСГ на 3-й день спонтанного менструального цикла, связанное с измерениями E2 и AMH, важно для оценки резерва яичников с целью персонализации протокола стимуляции яичников у женщин, подвергающихся экстракорпоральному оплодотворению (ЭКО) [1].Повышенный уровень ФСГ на 3-й день обычно наблюдается в случаях преждевременной недостаточности яичников или гонадотропин-секретирующих опухолях [9, 10]. В этом случае недостаточность функции яичников может быть исключена из-за повышенных уровней АФК и АМГ. В нашем случае описание нарушений менструального цикла, таких как спаниоменорея или даже аменорея, и повышенная АЧХ (примерно 40) являются двумя Роттердамскими критериями. Роттердамские критерии определяют СПКЯ по наличию как минимум двух из трех критериев: олигоановуляции, клинической и / или биохимической гиперандрогении и поликистозных яичников (≥12 фолликулов диаметром 2–9 мм или объем яичников> 10 мл в хотя бы один яичник) [6].У этой пациентки подозревается СПКЯ — частое эндокринное заболевание у женщин репродуктивного возраста. Более того, здесь повышен уровень АМГ, надежного маркера поликистозных яичников при СПКЯ [7, 11]. Кроме того, МРТ гипофиза была нормальной, что исключило опухолевую этиологию. Таким образом, можно исключить преждевременную недостаточность яичников и гонадотропин-секретирующую опухоль. Следовательно, у этого изолированного и стойкого повышенного уровня ФСГ предполагалась другая этиология.

Помимо СПКЯ, у этого пациента был аутоиммунитет щитовидной железы.Это часто встречается у женщин репродуктивного возраста, может быть связано с женским бесплодием и даже отрицательно повлиять на исход ЭКО [12]. Кроме того, некоторые исследования также предполагают связь между аутоиммунным тиреоидитом и СПКЯ [13]. Несколько исследований описали связь между преждевременной недостаточностью яичников и аутоиммунными заболеваниями, такими как аутоиммунитет надпочечников, тиреоидит Хашимото, сахарный диабет и ревматоидный артрит. Среди всех аутоиммунных заболеваний, связанных с ПНЯ, наиболее распространены заболевания щитовидной железы [14].Было высказано предположение, что снижение фертильности может быть связано с нарушением регуляции реакций иммунной системы, что приводит к увеличению продукции аутоантител [15]. Этот аутоиммунитет увеличивает риск выкидыша, снижает женскую плодовитость и эффективность лечения бесплодия. В случае аутоиммунного заболевания, такого как заболевания щитовидной железы, у бесплодных женщин описано наличие антигонадотропинов (анти-ЛГ, анти-ФСГ) [14].

Эти антитела были идентифицированы у пациентов с плохим ответом [14] и в случаях повторной неудачной имплантации [15].Эти наблюдения предполагают, что эти антитела могут ингибировать эффекты либо ФСГ, либо ЛГ на фолликулогенез и овуляцию in vivo , прерывая связывание гормона с рецептором или увеличивая их клиренс. Иммунизация против экзогенных гонадотропинов была предложена для объяснения наличия антител против ФСГ или против ЛГ у женщин, подвергающихся ЭКО, и может увеличиваться при повторных циклах ЭКО [16]. Однако перед обследованием на бесплодие нашему пациенту не вводили экзогенный ФСГ, что опровергает эту гипотезу.Следовательно, аутоиммунитет к гонадотропинам может представлять интересный патофизиологический механизм при ПНЯ.

Что касается анти-ФСГ, большинство этих аутоантител направлены против β -субъединицы фолликулостимулирующего гормона [3]. Эти антитела преимущественно распознавали область из 16 аминокислот, вероятно, представляющую иммунодоминантный эпитоп [17]. Субъединица β играет роль в связывании рецептора ФСГ. Следовательно, наличие анти-ФСГ, направленного против β -субъединицы, может объяснить случаи бесплодия.У нашего пациента анализы были в пользу аутоантител, направленных против β -субъединицы [18].

Эти аутоантитела глубоко влияют на базальный гормональный статус и вынуждают специалистов по вспомогательным репродуктивным технологиям (ВРТ) адаптировать стратегии лечения. Для подавления секреции гонадотропинов и, как следствие, выработки аутоантител, было предложено долгосрочное лечение противозачаточными таблетками, вызывающими эстрогенез. Другие рекомендуют иммуномодулирующую терапию, такую ​​как лечение глюкокортикоидами для женщин с аутоиммунными заболеваниями, антитела против яичников или гонадотропина, чтобы восстановить удовлетворительную функцию яичников и, в конечном итоге, улучшить исход ЭКО [15, 19] . Однако эти стратегии еще не доказали свою применимость в таких случаях, и лучший протокол еще предстоит определить. В случае, описанном здесь, пара была проинформирована об этих вариантах и ​​в конце концов решила не пробовать это лечение. Что касается СПКЯ, очень часто предлагалось правильное питание, физические упражнения и отказ от курения. При отсутствии гиперандрогении в назначении антиандрогенов не было необходимости. Было предложено индуцировать овуляцию кломифеном, но пара в конце концов решила не проводить оплодотворение с медицинской помощью [20].Начато лечение L-тироксином.

С аналитической точки зрения, антитела против гонадотропинов могут мешать иммуноанализу через образование циркулирующих гормонально-иммуноглобулиновых комплексов [4] . Присутствие гетерофильных антител, направленных против антител различных видов животных, присутствующих в иммуноанализе [21], обнаруженных, например, в случаях ревматоидного артрита, также может приводить к ложно высоким или ложно низким результатам в широко используемых иммуноанализах, таких как ФСГ, ЛГ, ХГЧ. или AMH.При подозрении на присутствие антигонадотропинов следует выполнять важные аналитические шаги. Во-первых, тот же образец следует повторно проанализировать с помощью того же анализа, поскольку наличие интерференции антител может дать разные результаты при повторении теста. Во-вторых, следует провести гормональное измерение с помощью альтернативного анализа. Действительно, использование разных антител в различных иммуноанализах может привести к разной чувствительности к аналитическим помехам. Другая стратегия — выполнить несколько разведений.Серийные разведения сыворотки позволят отличить истинное аналит от перекрестной реактивности, обусловленной гетерофильными антителами. Последовательные разведения сывороточных анализов были выполнены путем разведения образца с использованием разбавителей производителя. Нелинейная зависимость часто получается для серийных разведений в присутствии гетерофильных антител. Однако можно наблюдать линейную зависимость в серийных разведениях в образцах, содержащих гетерофильные антитела [22]. Присутствие гетерофильных антител затем может быть подтверждено добавлением нерелевантного иммуноглобулина животного к образцу перед повторным анализом, который может нейтрализовать мешающие антитела.Наконец, наличие антигонадотропинов должно быть оценено гормональным измерением после преципитации ПЭГ и дополнительно подтверждено хроматографией. Эта стратегия и процедуры эквивалентны тем, которые используются для обнаружения макропролактина [8].

Аутоантитела против ФСГ были идентифицированы у этого пациента, направленного на обследование на бесплодие и у которого наблюдались необъяснимые повышенные уровни изолированного ФСГ. Такое иммунологическое нарушение регуляции может быть исследовано в случаях необъяснимого бесплодия и рецидивирующей неудачи ЭКО.Поскольку антигонадотропины могут мешать иммуноанализу, диалог между биологом и клиницистом, очевидно, имеет решающее значение для предотвращения неправильного клинического диагноза.

4. Заключение

Изолированный высокий базальный уровень ФСГ может возникать в ограниченном количестве клинических ситуаций, таких как недостаточность яичников и опухоль, секретирующая гонадотропин. Для определения наличия аутоантител против ФСГ рекомендуется измерение ФСГ после преципитации ПЭГ, которое должно быть подтверждено гель-фильтрационной хроматографией.Антигонадотропины были обнаружены у некоторых бесплодных женщин, и эти антитела могут ингибировать активность гормонов in vivo и снижать эффективность лечения стимуляцией яичников. Эти аутоантитела необходимо проверять, чтобы адаптировать стратегии лечения и повысить шансы на беременность. Общение между лабораторным специалистом и клиницистом имеет решающее значение для предотвращения неправильного клинического диагноза.

Сокращения

Анти-тиреоглобиновые антитела

СПКЯ:	Синдром поликистозных яичников
ТТГ:	Тиреотропный гормон
T4L:	Свободный тироксин
AAT антитела
E2:	Эстрадиол
LH:	Лютеинизирующий гормон
AMH:	Антимюллеров гормон
FSH:	Фолликулостимулирующий гормон
MRI:	MRI:	MRI резонансная томография
ПЭГ:	Полиэтиленгликоль
макро-ФСГ:	Аутоиммунный иммуноглобулиновый комплекс ФСГ
ХГЧ:	Хорионический гонадотропин человека
ЭКО:	ЭКО:	ЭКО:	Оплодотворение
POF:	Premat недостаточность яичников.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Авторы выражают признательность Наджибе Лахлу (Лаборатория гормональной биологии — Больница Кочин, Париж, Франция) за участие в экспериментах (гель-фильтрационная хроматография).

Sea Horse FSH Стекловолоконный фильтр (AMS1343): картриджные фильтры

1 — Винт воздуховыпускного устройства с уплотнительным кольцом (Примечание 5)	24339	PacFab — Purex (PENTAIR) 273512	$ 7.20	Разместить заказ
2 — Кольцо круглого сечения (273513)	71196	Стандартное O-628	$ 0,95	Разместить заказ
3 — Колпачок (Примечание 5)	24628	PacFab — Purex (PENTAIR) 273501	$ 6,95	Разместить заказ
4 — Манометр с задней установкой (15-5050)	9228	Стандартный 9228	$ 4,55	Разместить заказ
5 — Уплотнительное кольцо, переборка 2 « (154492) (Примечание 5)	9825	Стандартное O-179	$ 1.80	Разместить заказ
7 — Фильтр — Воздушный клапан	24860	PacFab — Purex (PENTAIR) 172855	$ 19,40	Разместить заказ
11 — Уплотнительное кольцо Заменяет 192323	28150	Standard O-24	$ 2,25	Разместить заказ
12 — Трубопровод в сборе — верхний FSh400	9713	PacFab — Purex (PENTAIR) 195214	$ 62,30	Разместить заказ
12 — Трубопровод в сборе — Верхний ФШ500	24733	PacFab — Purex (PENTAIR) 195215	77 $.50	Разместить заказ
12 — Узел трубопровода — Верхний FSH500	9715	PacFab — Purex (PENTAIR) 195216	$ 69,10	Разместить заказ
13 — Резервуар с уплотнительным кольцом	24812	PacFab — Purex (PENTAIR) 195008	$ 32,55	Разместить заказ
14 — Сборка ленты — полная (Примечание 1)	24736	PacFab — Purex (PENTAIR) 195351	$ 292,00	Разместить заказ
17 — Кольцо уплотнительное, переборка (192320)	9726	Стандарт O-409	$ 1.80	Разместить заказ
18 — Переборка — 2-3 / 8-8 Поперечная головка	9727	PacFab — Purex (PENTAIR) 194801	$ 85,95	Разместить заказ
19 — (274494)	25036	Стандартный O-83	$ 1,80	Разместить заказ
20 — Адаптер — перегородка 1-1 / 2 «x 2», зажим	24750	PacFab — Purex (PENTAIR) 274404	$ 26,40	Разместить заказ
21 — Гайка, переходник переборки, 2 Треб.	24621	PacFab — Purex (PENTAIR) 274407	$ 17,60	Разместить заказ
23 — Адаптер уплотнительного кольца 6 «	9609	PacFab — Purex (PENTAIR) 154494	$ 6,05	Разместить заказ
24 — Трубопровод в сборе — Нижний FSH (Примечание 4)	24754	PacFab — Purex (PENTAIR) 195308	$ 90,05	Разместить заказ
25 — Опора	24755	PacFab — Purex ( PENTAIR) 195153	97 $.45	Разместить заказ
26 — Заглушка 2 «NPSM	9803	PacFab — Purex (PENTAIR) 195829	$ 7,70	Разместить заказ
27 — Адаптер — контрфорс 6 дюймов — черный (Примечания 6 , 7)	24757	PacFab — Purex (PENTAIR) 195221	$ 37,70	Разместить заказ
28 — Шайба — полиэтилен	24601	PacFab — Purex (PENTAIR) 195004	$ 3.65	Разместить заказ
29 — Контргайка	51854	Pentair 154412	$ 9.00	Разместить заказ
31 — Шайба, малый внутренний диаметр NS (Примечание 1)	24848	PacFab — Purex (PENTAIR) 195610	$ 8,95	Разместить заказ
32 — Быстроразъемная пружина (Примечание 1)	24849	PacFab — Purex (PENTAIR) 195612	$ 19,45	Разместить заказ
33 — Шайба, NS Большой ID (Примечание 1)	24762	PacFab — Purex (PENTAIR) 195611	$ 9.65	Разместить заказ
34 — Гайка с механической обработкой, быстроразъемное соединение (Примечание 1)	24851	PacFab — Purex (PENTAIR) 194997	$ 11,80	Разместить заказ
35 — Картридж — Sea Horse 300	24700	PacFab — Purex (PENTAIR) R173316	$ 67,90	Оформить заказ
35 — Картридж — Sea Horse 300, Generic	23517	Unicel 23517	56 долларов США.25	Разместить заказ
35 — Картридж — Sea Horse 400	24765	PacFab — Purex (PENTAIR) R173317	$ 92,30	Разместить заказ
35 — Картридж — Sea Horse 400, универсальный	54506	Unicel 54506	$ 84,60	Разместить заказ
35 — Картридж — Sea Horse 500	24704	PacFab — Purex (PENTAIR) R173318	$ 96,95	Разместить заказ
35 — Картридж фильтра , Подходит для Pacfab FSH500, 125 кв. Футов	54507	Unicel 54507	$ 104.50	Разместить заказ
29 — Контргайка	51854	Pentair 154412	$ 9,00	Разместить заказ
38 — Прокладка — Внутренняя верхняя часть (Примечание 5)	24705	PacFab — Purex (PENTAIR ) 273505	$ 5,70	Разместить заказ
39 — Прокладка — внешняя	24771	PacFab — Purex (PENTAIR) 273502	$ 5,70	Разместить заказ
44 — Ручной узел сброса воздуха (заменяет 261003 / 273510/273581, 27-3510)	25000	Purex (PENTAIR) 273550	85 долларов США.54 — Ручной узел сброса воздуха (заменяет 261003/273510/273581, 27-3510)	25000	Purex (PENTAIR) 273550	$ 85,55	Разместить заказ

Одноразовый процесс производства rh-FSHBioProcess International

Рис. 1. Процесс получения rh-FSH выше по потоку с двумя уровнями одноразовых биореакторных систем

Фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) представляет собой гетеродимерный гликопротеин, состоящий из нековалентно связанных субъединиц α и β.Он стимулирует рост незрелых фолликулов в яичниках и первичных сперматоцитов в семенниках и, таким образом, играет важную роль в воспроизводстве человека ( 1 ). Менопаузальный гонадотропин человека для лечения бесплодия впервые был введен в клиническую практику в 1950 году ( 2 , 3 ). Впоследствии лечение мочевым ФСГ было заменено рекомбинантным человеческим ФСГ (рч-ФСГ), который, как было показано, дает несколько преимуществ, таких как отсутствие активности лютеинизирующего гормона, более высокая специфическая активность и более низкий риск инфекции ( 4 ).

Первый коммерчески продаваемый rh-FSH был разработан с использованием сосуда из нержавеющей стали и системы непрерывной перфузии со средой, содержащей сыворотку ( 5 ). Однако многие биофармацевтические компании переходят с таких производственных систем на одноразовые (SU) биореакторы ( 6 ). Это произошло из-за множества производственных преимуществ биореакторов SU, включая меньшее количество требований к валидации, меньшие риски загрязнения, устранение этапов очистки и стерилизации и быстрое переключение между партиями, что приводит к сокращению времени подготовки ( 7 ).Такие преимущества способствовали снижению капитальных затрат на 40–50%, эксплуатационных расходов на 20–30% и времени постройки на 30% по сравнению с традиционной технологией резервуаров из нержавеющей стали ( 8 ).

Используя стабильно трансформированные клетки яичника китайского хомячка (СНО), секретирующие rh-ФСГ, процесс получения чистого рекомбинантного гонадотропина человека (Gonapure), производимый нашей компанией, обеспечивает стабильно высокое производство гормонов в предшествующем периодическом процессе с подпиткой до конечных 50-л и 200-литровых биореакторов SU . За этим следует эффективный и надежный способ очистки ниже по потоку.Здесь мы описываем эту производственную стратегию и обсуждаем рентабельность.

материалы и методы
Upstream Processing (USP): Стабильно трансформированная линия клеток CHO-DG44, секретирующая rh-FSH, была получена из штамма CHO с дефицитом дигидрофолатредуктазы (dhfr–) (ProBioGen AG) с использованием эффективного клона. стратегия выбора и пошаговая оценка. Его выращивали в суспензионной культуре. Используя наш хорошо документированный и проверенный внутренний производственный процесс, производство rh-FSH было начато с одного флакона из полностью охарактеризованного рабочего банка клеток, содержащего 1.Суспензия клеток 8 мл. Мы разморозили клетки CHO-DG44 и промыли их, чтобы удалить криоконсервант, затем ресуспендировали их в 25-мл Т-образной колбе (Greiner Bio-One, колбы CELLSTAR для культивирования клеток) со средой без компонентов животного происхождения EX-CELL CHO DHFR −ACF (SAFC, Сигма). Мы инкубировали клетки в увлажненном инкубаторе с 5% CO ₂ при 37 ° C (Heraeus HERAcell, Thermo Scientific). Для увеличения объема культуры мы пересевали клетки с той же средой каждые два-три дня с использованием Т-образных колб (25 и 50 мл) и одноразовых пакетов (10-литровый, 20-литровый и 50-литровый мешки CultiBags от Sartorius Stedim Biotech) до тех пор, пока были достигнуты достаточный объем культуры и количество клеток для инокуляции последнего одноразового биореактора.

На рисунке 1 показаны две использованные процедуры масштабирования. В обоих конечных биореакторах SU — HyClone S.U.B. 50 л (Thermo Scientific) и BIOSTAT CultiBag STR 200 L (Sartorius Stedim Biotech) — культивирование клеток поддерживали в течение 10 дней при начальной температуре 37 ° C.

Начальное количество клеток для 50-литрового биореактора составляло 0,40–0,50 × 10 ⁶ жизнеспособных клеток / мл и 0,25–0,35 × 10 ⁶ жизнеспособных клеток / мл для 200-литрового биореактора. Устанавливали pH 7,2 (± 0,1) и контролировали добавлением 7.5% NaHCO ₃ (Sigma-Aldrich) и CO ₂ . Растворенный кислород (DO) доводили до заданного значения 30% (± 10%) и контролировали путем продувки чистым кислородом. Мы постепенно увеличивали скорость перемешивания во время процесса культивирования, пока она не была зафиксирована на 4-й день на уровне 120 об / мин для меньшего биореактора SU на 50 л и 140 об / мин для большего биореактора SU на 200 л. Мы ежедневно брали образцы для анализа количества жизнеспособных клеток и их жизнеспособности с помощью NucleoCounter (ChemoMetec). Через 10 дней мы собрали культуральный супернатант, содержащий rh-FSH, с помощью одноразового устройства для глубокой фильтрации (Pod Millistak, Millipore).Затем бесклеточный культуральный супернатант подвергали прямой стерильной фильтрации через одноразовый фильтр PES 0,22 мкм в одноразовый стерильный мешок (Millipore). Общий период для каждого предшествующего процесса с использованием одноразового биореактора на 50 л составлял 25 дней по сравнению с 26 днями для биореактора SU на 200 л.

Рисунок 2: Последующий процесс производства рч-ФСГ с последовательным выделением отдельных этапов очистки до рецептуры концентрированного API

Последующая обработка (DSP) rh-FSH представляла собой многоступенчатую процедуру, включающую как подготовку буфера в условиях одноразового использования, так и очистку DSP.Буферы готовили в мешках для миксеров (Millipore), а затем фильтровали через фильтры 0,2 мкм (Opticap XL, Millipore) в одноразовые мешки (Mobius, Millipore). После удаления клеток мы обработали супернатант культуры в семь последовательных этапов (рис. 2). Первоначально мы использовали фильтрацию с тангенциальным потоком (TFF, GE Healthcare Life Sciences) с общей площадью поверхности мембраны 2,5 м ² (Millipore), чтобы сконцентрировать 200 л супернатанта в 40 раз. Мы провели замену буфера с использованием ацетата аммония с диафильтрацией для удаления компонентов культуральной среды и деградированных белков, а также для подготовки концентрата супернатанта для хроматографической очистки.

Последующий процесс rh-FSH включал три стадии хроматографии для очистки. Первоначально концентрат супернатанта загружали в колонку для анионообменной хроматографии (AEX), используя ÄKTApilot (GE Healthcare) в качестве устройства для обработки. Для инактивации вируса мы обрабатывали основную фракцию AEX химически в течение 60 мин. инкубация с растворителем и детергентом (S – D). Затем эту фракцию, обработанную S – D, готовили с добавлением большого количества соли для загрузки в первую колонку гидрофобного взаимодействия (HIC 1).Точно так же основную фракцию HIC получали путем регулирования ее проводимости перед загрузкой во вторую колонку HIC (HIC 2). Основную фракцию HIC из этой колонки фильтровали через мембранный фильтр с диаметром пор 20 нм (Millipore) для удаления вирусов.

Отфильтрованную от вируса фракцию использовали для замены буфера и окончательной рецептуры с помощью системы TFF (Millipore). Наконец, мы отфильтровали массу с использованием стерильного фильтра 0,22 мкм перед хранением при –80 ° C, как для концентрированного лекарственного вещества rh-FSH. Последний был разморожен, разбавлен до конечной концентрации, наполнен и лиофилизирован для получения конечного лекарственного продукта.Концентрации rh-FSH как на этапах USP, так и на этапах DSP определяли с использованием проверенных на собственном предприятии методов высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Результаты и обсуждение
Сравнение масштабирования процесса производства rh-FSH между одноразовыми биореакторами на 50 и 200 л показало снижение жизнеспособности и продуктивности клеток в более крупном масштабе. Когда 200-литровый биореактор был инокулирован при той же плотности посевных клеток, что и 50-литровый биореактор SU, плотность клеток достигла максимума между 4-м и 5-м днями культивирования, но в конце периода жизнеспособность клеток резко упала. выращивание (данные не показаны).

Напротив, когда мы высевали при низком начальном количестве клеток (что не приводило к высокой максимальной плотности клеток), жизнеспособность не снижалась резко. Инокуляция 200-литрового биореактора SU с ~ 50% плотности посевных клеток в масштабе 50-л приводила к аналогичным кривым роста клеток в обоих случаях со сравнимыми выходами продукта. Мы выполнили восходящий процесс rh-FSH три раза в масштабе 50 л и пять раз в масштабе 200 л. Все значения, показанные здесь, являются средними из прогонов каждой шкалы с соответствующими стандартными отклонениями (SD).

Рисунок 3: Средняя жизнеспособность (%) и средняя плотность жизнеспособных клеток со стандартным отклонением для системы HyClone S.U.B на 50 л ( n = 3) и системы BIOSTAT CultiBag STR на 200 л ( n = 5)

Количество и жизнеспособность клеток в различных масштабах: На рисунке 3 показана плотность жизнеспособных клеток и жизнеспособность клеток на протяжении всего 10-дневного интервала культивирования в последних биореакторах. Плотность инокуляционных клеток для 50-литрового биореактора SU составляла 0,49 × 10 ⁶ клеток / мл (SD = ± 0.01 × 10 ⁶ клеток / мл), тогда как для биореактора SU на 200 л это было 0,26 × 10 ⁶ клеток / мл (SD = ± 0,02 × 10 ⁶ клеток / мл). Достигнутая максимальная плотность клеток составляла 3,90 × 10 ⁶ клеток / мл (SD = ± 0,45 × 10 ⁶ клеток / мл) в 50-литровом биореакторе. Для шкалы 200 л максимальная плотность клеток составляла 3,80 × 10 ⁶ клеток / мл (стандартное отклонение = ± 0,20 × 10 ⁶ клеток / мл). Жизнеспособность клеток в день сбора (DoH) для шкалы 50 л составила 86,6% (SD = ± 1,36%), что было аналогично биореактору на 200 л (87.8%, SD = ± 1,1%). Эти результаты указывают на эффективное и надежное масштабирование восходящего процесса одноразового использования rh-FSH с аналогичной и стабильной производительностью в обоих масштабах.

Рис. 4: Сравнение количественного определения белка rh-FSH в биореакторах SU на 50 и 200 л; (A) концентрация rh-FSH в день сбора урожая, (B) удельная продуктивность клеток, рассчитанная за период, начиная с дня 4 до конца культивирования, и (C) общее количество белка rh-FSH, продуцируемого в ходе предшествующего процесса. секретно в СМИ

Высокий уровень продуктивности rh-FSH: Чтобы определить производительность процесса, мы количественно определили концентрацию белка rh-FSH в день сбора урожая (Рисунок 4A) вместе с удельной продуктивностью rh-FSH клеток (Рисунок 4B).Количества rh-FSH / мл и rh-FSH / клетка / день были сопоставимы и находились в том же диапазоне для обоих масштабов биореактора SU. Общее количество белка rh-FSH (рис. 4C), произведенного из 200-литрового биореактора SU (6550 мг), было примерно в 4,4 раза больше, чем в 50-литровом биореакторе SU (1495 мг), что соответствует четырехкратной разнице в объеме. в расширении УТП.

Надежный и проверенный процесс очистки rh-FSH: Очистка rh-FSH — надежный, последовательный процесс со средним общим выходом 27.73% для партий биореактора SU на 200 л ( n = 4, SD = 1,63%) и 15,51% для партий биореактора SU на 50 л ( n = 3, SD = 2,71%) (Рисунок 5) .

Четырехкратное увеличение предшествующего процесса позволило загрузить оптимальное количество целевого белка в хроматографические колонки. Следовательно, индивидуальные выходы хроматографии значительно увеличились. Выход ионообменной хроматографии (IEC) увеличился на 20%, выход HIC 1 увеличился на 17%, а выход HIC 2 увеличился на 3%.Эти отдельные улучшения выхода rh-FSH привели к значительному увеличению совокупного выхода для последующего процесса на 79%. Мы рассчитали это увеличение, сравнив фактическую производительность обоих процессов и принимая во внимание промежуточные потери из-за подготовки загрузки каждой стадии. Эти потери значительно ниже при масштабе 200 л (предположительно из-за более высокого количества rh-FSH в промежуточных фракциях) и были отражены в фактических общих выходах обоих процессов.Более того, отдельные стадии очистки давали хорошо воспроизводимые выходы. Это демонстрируется SD для ступенчатых выходов независимо оцененных партий биореакторов SU на 200 л: IEC (SD = 0,79%), инактивация вируса (SD = 0,87%), HIC 1 (SD = 3,25%), HIC 2 (SD = 2,29%), фильтрация вируса (SD = 3,9%) и состав (SD = 3,37%).

Рисунок 5: Средние выходы отдельных стадий последующей обработки (DSP) и средние общие выходы (последние были рассчитаны на основе конечного очищенного ФСГ и нагрузки ионообменной хроматографии (IEC), включая потери между стадиями подготовки) для обоих 50- Производственные партии L ( n = 3) и 200-L ( n = 4): VI = инактивация вируса, HIC = хроматография гидрофобного взаимодействия (1 и 2), VF = фильтрация вируса, форма = состав

Для сравнения, типичный последующий процесс производства рекомбинантного белка, полученного из культуры клеток млекопитающих, состоит из трех этапов хроматографии ( 9 ) и, по крайней мере, двух этапов, способных удалять и / или инактивировать вирусы в оболочке с помощью ортогональных механизмов ( 10 ) .

Charles River Laboratories (Кельн, Германия) подтвердили способность производственного процесса Gonapure эффективно удалять и инактивировать вирусы. Кумулятивное логарифмическое сокращение охваченных вирусов составило> 15 журналов, а для вирусов без оболочки -> 11 журналов (данные не показаны).

Рисунок 6: Представление (A) относительных прямых переменных затрат каждого производственного процесса, включая затраты на добычу, переработку и анализ; и (B) относительные прямые переменные затраты на одну ампулу в каждом масштабе процесса с относительным соотношением времени, необходимого для производства определенного количества ампул

Экономия за счет масштаба и экономии затрат: На рисунке 6 показаны расчеты затрат, аналогичные тем, которые были опубликованы Мэдлин ( 11 ).На рисунке показаны различия между общими процессами для 50-литровых и 200-литровых биореакторов SU, включая DSP. Числовые значения в столбцах подчеркивают важность каждого элемента в данном процессе и позволяют напрямую сравнивать эти значения между процессами.

Рисунок 6A показывает, что прямые переменные затраты процесса биореактора SU на 200 л почти в 1,5 раза выше, чем при масштабе 50 л, в основном из-за увеличения стоимости материалов и инструментов. Эти затраты были рассчитаны путем сложения значений всех элементов в каждом столбце и деления полученной 200-литровой стоимости процесса на 50-литровую стоимость процесса.

Увеличение масштаба процесса с 50 до 200 л привело к более чем четырехкратному увеличению белка rh-FSH, продуцируемого в ходе предшествующего процесса. Оптимизация отдельных стадий очистки почти удвоила конечный выход последующего процесса. Эти результаты привели к восьмикратному увеличению очищенного материала. Такое большое увеличение количества конечного очищенного материала в результате процесса 200 л SU привело к резкому снижению затрат на 81% прямых затрат на каждую отдельную ампулу лекарственного продукта.Более того, это уменьшило время, необходимое для производства определенного количества активного фармацевтического ингредиента (API) из 50-литрового шкафа, в шесть раз (Рисунок 6B).

Наши результаты ясно показывают, что увеличение объема до 200 л USP положительно сказалось на экономике и экономической эффективности этого процесса. Оптимизация герметичности этого USP позволяет разместить дополнительный производственный процесс в той же рабочей зоне.

Оптимизированная система Фармакопеи США
Компания Rhein-Minapharm Biogenetics разработала первый производственный процесс, основанный на полной концепции «одноразового использования» в сочетании с надежным и эффективным последующим процессом производства рч-ФСГ, полученного из клеток СНО.Более того, оптимизированный процесс rh-FSH в одноразовом биореакторе на 200 л был в целом в 5,2 раза более рентабельным и в шесть раз больше экономии времени, чем в масштабе 50 л. Следовательно, производственный процесс с использованием крупномасштабного биореактора SU может производить более 1,5 г чистого рекомбинантного гонадотропина человека (Gonapure), что эквивалентно 14 миллионам международных единиц (МЕ), готовых для удовлетворения потребностей египетского рынка. Gonapure предлагается в стерильном лиофилизированном флаконе с одной дозой, содержащем 75 или 150 МЕ rh-FSH с разбавителем (стерильная вода для инъекций) для восстановления до 1 мл дозы.

Конфликт интересов
Все авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности
Мы благодарим Шайма Эль Тайеб и Момен Амер за их вклад на ранних этапах разработки процесса ферментации, а также Мэри Мунир Фахим и Мариан Магди за их усилия в разработке DSP. Кроме того, мы выражаем нашу благодарность доктору Энтони Мигеру за его усилия по предоставлению поддержки языкового редактирования.

Ссылки
1 Pierce JG, Parsons TF.Гликопротеиновые гормоны: структура и функции. Annu. Ред. Biochem. 50, 1981: 465–495.

2 Setti PL, et al. Человеческий рекомбинантный фолликулостимулирующий гормон (rFSH) в сравнении с менопаузальным гонадотропином в моче человека (HMG) для стимуляции яичников при вспомогательной репродукции: обзор литературы и оценка затрат. J. Endocrinol. Инвестируйте . 38 (5) 2014: 497–503.

3 Donini P, Montezemolo R. Rassegna di Clinica: Terapia e Scienze Affini .Биологические лаборатории Института Сероно 48, 1949: 3–28.

4 Loumaye E, Campbell R, Salat-Baroux J. Человеческий фолликулостимулирующий гормон, продуцируемый технологией рекомбинантной ДНК: обзор для клиницистов. Гум. Репродукция . Обновление 1 (2) 1995: 188-199.

5 Loumaye E, et al. Рекомбинантный фолликулостимулирующий гормон: разработка первого биотехнологического продукта для лечения бесплодия. Гум. Репродукция. Обновление 4 (6) 1998: 862–881.

6 Дауни В., Найсли Х. Технологии одноразовых одноразовых материалов в контрактном производстве биофармацевтических препаратов. Am. Pharm. Ред. . 14 (5) 2011.

7 Sandle T, Saghee RM. Некоторые соображения по применению одноразовой технологии и одноразовых систем в биофармацевтических препаратах. J. Comm. Биотех . 17, 2011: 319–329; DOI: 10.1057 / jcb.2011.21.

8 Эрнандес Р. Основные тенденции в биофармацевтическом производстве. Pharm. Technol. 39 (6) 2015.

9 Гронемейер П., Дитц Р., Штрубе Дж. Тенденции в разработке предшествующих и последующих процессов производства антител. Дж. Биоенг . 1 (4) 2014: 188–212; DOI: 10.3390 / bioengineering1040188.

10 Технический отчет, серия 924, приложение 4: Руководство по процедурам инактивации и удаления вирусов, предназначенное для обеспечения вирусной безопасности продуктов плазмы крови человека. Всемирная организация здравоохранения: Женева, Швейцария, 2004 г .; www.who.int/bloodproducts/publications/WHO_TRS_924_A4.pdf.

11 Мэдлин Б. и др. Культивирование клеточной линии, полученной из ES утки, в одноразовых биореакторах: быстрая, эффективная и экономичная система производства вакцин на основе суспензионной культуры. Биопроцесс Инт . 13 (3) 2015: S26 – S33.

Шади Таммам — старший специалист по ферментации, Мина Хани — старший специалист по очистке, Эндрю Сами — фармацевт по очистке белков, Сьюзан Кох — менеджер по производству, Франк Мюллер — старший менеджер биофармацевтических проектов, 25 Ральф 25 Ральф Шиллинг — технический менеджер по производству и автор-корреспондент. Ян Роде — менеджер по исследованиям и разработкам в RheinMinapharm Biogenetics, улица Мина, 3-я промышленная зона А2, 10-й квартал города Рамадан, Египет, 20-15-412157-3366; jrhode @ minapharm.com.

границ | Взаимодействие фолликулостимулирующего гормона и фактора стволовых клеток для стимулирования первичной сборки фолликулов у цыплят

Введение

Продолжительность репродуктивной жизни самок млекопитающих определяется во время рождения путем создания пула примордиальных фолликулов, в котором ооциты окружены слоем уплощенных прегранулезных клеток (1, 2). Во время образования примордиальных фолликулов кисты зародышевых клеток распадаются на отдельные ооциты, окруженные прегранулезными клетками, этот процесс может быть организован каким-либо стимулом, отличным от апоптоза, таким как миграция прегранулезных клеток для обволакивания ооцита (3).Половые клетки подвергаются митозу или мейозу у куриных эмбрионов преимущественно под контролем гонадотропинов, и есть немного половых клеток, которые продолжали бы пролиферацию в коре яичников курицы после вылупления (4). У вылупившихся цыплят первоначальное развитие пула примордиальных фолликулов происходит в течение первых 4 дней после вылупления за счет разрушения гнезда зародышевой линии и включения в курицу ооцитов с прегранулезными клетками. Однако основные механизмы, регулирующие эти процессы в яичниках цыплят, остаются малоизученными.Исследования самок млекопитающих показали, что они не способны производить ооциты и фолликулы после рождения (5, 6). В этом отношении ооциты в примордиальных фолликулах представляют собой весь доступный репродуктивный ресурс.

Роль гормонов, включая гонадотропины, эстрадиол (E ₂ ) и прогестерон, которые действуют во время образования примордиальных фолликулов, изучалась у различных видов млекопитающих (7–9). Фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) оказывает множество эффектов на развитие яичников у млекопитающих, таких как фолликулогенез и выживаемость преантральных фолликулов (10).Ингибирующий эффект антитела против ФСГ и стимулирующий эффект ФСГ показали, что ФСГ ускоряет образование примордиальных фолликулов в яичниках хомячка, где рецептор ФСГ (ФСГ), регулируемый ФСГ и E ₂ , отвечает за образование примордиальных фолликулов. (11, 12). Было также замечено, что ФСГ способствует образованию примордиальных фолликулов, стимулируя локальные сигнальные пути активина и экспрессию специфичных для ооцитов факторов транскрипции у мышей (13). Таким образом, имеется множество доказательств того, что ФСГ может способствовать сборке примордиальных фолликулов в яичниках млекопитающих.Однако влияние ФСГ на сборку примордиальных фолликулов кур остается в значительной степени неясным.

Во время развития фолликулов ФСГ регулирует как высвобождение нескольких паракринных факторов, так и функцию взаимодействия ооцитов и гранулезных клеток. Ван и Рой показали, что действие ФСГ, участвующего в фолликулогенезе, по-видимому, происходит через локальный фактор стволовых клеток (SCF) (11). Фактор стволовых клеток также известен как лиганд KIT (KITL), и его рецептор KIT представляет собой источник передачи сигналов KIT, который известен своей функцией, способствующей выживанию, пролиферации и дифференцировке клеток.Более того, передача сигналов KIT управляет ростом ооцитов в преантральных фолликулах, изменяя соотношение между размером ооцита и размером фолликула (14). Аутофосфорилирование KIT способно активировать несколько нижестоящих каскадов, включая пути фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3K) и митоген-активируемой протеинкиназы (MAPK) (15, 16). Взаимодействие между ФСГ и путями PI3K и MAPK также имеет решающее значение для развития клеток яичников (17). Однако остается неизвестным, способен ли FSH сотрудничать с передачей сигналов KIT в фолликулогенезе куриных яичников.

Существует множество сигналов, участвующих в формировании примордиальных фолликулов (18, 19). Более того, развитие примордиальных фолликулов находится под строгим взаимодействием гормонов, цитокинов, коннексина и факторов транскрипции (20, 21). ФСГ может регулировать молекулы клеточного адгезива и факторы роста, чтобы модулировать образование примордиальных фолликулов (11, 22). Однако необходимо выяснить, может ли FSH взаимодействовать с передачей сигналов KIT, чтобы регулировать развитие примордиальных фолликулов птиц.

Поскольку фолликулогенез имеет решающее значение для будущей продуктивности кладки у видов домашних птиц, мы предположили, что ФСГ может способствовать сборке примордиальных фолликулов посредством эндогенной передачи сигналов KIT. Посредством введения in vivo, ФСГ и in vitro, культуры ткани яичника мы исследовали предполагаемый реципрокный эффект передачи сигналов ФСГ и SCF / KIT, способствующий развитию фолликулов на ранних стадиях развития курицы.

Материалы и методы

Лечение животных и сбор тканей

Яйца оплодотворенных цыплят Hyline ( Gallus gallus ) инкубировали в инкубаторе для яиц при 38.5 ° C, влажность 60% с циклом 12 часов света и 12 часов темноты. После вылупления цыплят выращивали при тех же циклах фотопериода. Все процедуры были выполнены в соответствии с Руководящими принципами по уходу и использованию лабораторных животных Чжэцзянского университета . Цыплятам-самкам внутрибрюшинно вводили 5 МЕ ФСГ [гетеродимер ФСГ-Fc / Fc человека, KN015, (23)] в 0,1 мл раствора PBS в день 4. Контрольным цыплятам вводили 0,1 мл раствора PBS. На 6 день цыплят умерщвляли после анестезии и собирали левые яичники для морфологического и биохимического анализа.

Органная культура

Отдельные левые яичники 4-дневных цыплят разрезали на 2–4 части для органной культуры. Фрагменты яичников культивировали на мембранных фильтрах Millipore 0,45 мкм. Каждый фрагмент яичника культивировали в шестилуночных планшетах при 38,5 ° C, 5% CO. ₂ с 2 мл среды Игла, модифицированной Дульбекко, и среды Хэма F-12 (DMEM / F-12, 1: 1, Hyclone, Utah, USA. ) с добавлением 2 мМ глутамина, 100 МЕ / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина (Gibco), 10 мкг / мл инсулина, 5 мкг / мл трансферрина, 30 нМ селенита (среда ITS, Sigma Aldrich, St.Луис, Миссури, США), 5% фетальной телячьей сыворотки (FCS, Hyclone, Юта, США) в качестве полной культуральной среды. Питательную среду и обработки обновляли каждые 36 часов. Яичники обрабатывали 0,01 МЕ / мл ФСГ, 20 нг / мл SCF (78062, Stem Cell Inc, Канада) и ФСГ + SCF соответственно. Для анализа включения 5-бром-20-дезоксиуридина (BrdU) яичники инкубировали с полной средой с добавлением 0,1 мг / мл BrdU (Sigma, Aldrich, США) при 38,5 ^o ° C, 5% CO ₂ в течение 12 дней. час Фрагменты яичников фиксировали в 4% параформальдегиде для морфологического наблюдения через 72 часа культивирования.После 48 ч культивирования фрагменты яичников собирали для вестерн-блоттинга и qRT-PCR.

Культура клеток яичников

Яичники цыплят 4-го дня разрезали на мелкие фрагменты и переваривали 1 мг / мл трипсин-ЭДТА (Solarbio, Пекин, Китай) (24). Диспергированные клетки фильтровали через сито 50 мкм и затем высевали в обработанные коллагеном шестилуночные планшеты с добавлением ITS и 5% FCS при плотности 5 × 10 ⁵ в 2 мл / лунку DMEM / F-12. (Гиклон, Юта, США).Клетки яичников обрабатывали 0,01 МЕ / мл ФСГ и инкубировали при 38,5 ° C и 5% CO ₂ .

Трансфекция миРНК

SCF и c-KIT

При 70% -ном слиянии культивируемых клеток яичников клетки после обработки ФСГ трансфицировали в течение 24 часов либо пулом SMART малой интерферирующей РНК (siRNA), специфичной для SCF, c-KIT, либо не подавляющим контролем (GenePharma Co ., Ltd., Шанхай, Китай) с использованием липофектамина 2000 (Invitrogen, Калифорния, США) в соответствии с инструкциями производителя.Через 24 ч смеси для трансфекции заменяли обычной средой. Антисмысловые последовательности праймеров для миРНК перечислены в таблице 1.

Таблица 1 . Антисмысловые праймеры для миРНК.

Морфологическое наблюдение

Яичники разрезали на парафиновые срезы 5 мкм и обрабатывали для гистологического исследования. Для окрашивания гематоксилином и эозином были отобраны пять серийных срезов по самому большому сечению яичников. В этих срезах подсчитывали количество фолликулов на кортикальную область ( ² мм) на каждой стадии развития.Ядра ооцитов должны быть видны в фолликуле для подсчета. Фолликулы классифицировались как на начальной стадии, так и на стадии роста. Примордиальные фолликулы состоят из ооцита, частично или полностью инкапсулированного плоскими плоскими клетками прегранулезы, тогда как растущие фолликулы содержат одну или несколько кубовидных гранулезных клеток в последовательных слоях вокруг ооцитов.

Иммуногистохимия

Срезы яичников курицы депарафинизировали и гидратировали. За обработкой 3% h3O2 в течение 20 минут для подавления активности эндогенной пероксидазы следовало извлечение антигена, которое проводили в течение 10 минут в 10 мМ цитратном буфере (pH 6.0). Срезы трижды промывали PBS и затем блокировали на 20 мин 5% нормальной козьей сывороткой. Срезы инкубировали с первичными антителами кролика против c-KIT (1: 100), кроличьего анти-CDK2 (1: 200), кроличьего анти-CCND1 (1: 200), кроличьего анти-E-кадгерина (1: 100, Boster, Ухань, Китай), кроличьи антитела против N-кадгерина (1: 200, Novus Biologicals, Литтлтон, США) и кроличьи антитела против каспазы-3 (1: 100, Abcam, Кембридж, Великобритания) в течение ночи при 4 ° C. Затем срезы инкубировали с козьими антителами против мышиных или козьих против кроличьих вторичных антител (1: 500, Abcam, Кембридж, Великобритания) в течение 60 минут при 37 ° C.Наконец, иммуноокрашивание визуализировали с использованием трех,3-диаминобензидина (Boster Bioengineering Co., Ltd., Ухань, Китай) и контрастного окрашивания гематоксилином. Положительное окрашивание (темно-коричневый) в каждом срезе исследовали по меньшей мере в пяти случайных полях при 400-кратном увеличении. Отрицательный контроль готовили таким же образом, за исключением того, что первичное антитело было заменено нормальной сывороткой, и использовали пять слайдов по максимальному поперечному сечению.

Иммунофлуоресцентное окрашивание

Срезы яичников инкубировали с кроличьими анти-FSHR (1: 500, ABclonal Technology Inc, Wuhan) в течение 12 ч при 4 ° C.Первое антитело было проверено Вестерн-блоттингом. После инкубации со вторичным антителом при 37 ° C в течение 1 ч срезы контрастировали 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI, Sigma Aldrich, St. Louis). Отрицательные срезы инкубировали с нормальной сывороткой вместо первичных антител, и использовали пять слайдов по максимальному поперечному сечению. Установленные слайды визуализировали с помощью лазерного сканирующего конфокального микроскопа (FV1000, Olympus, Токио, Япония).

Брду Инкорпорация

Фрагменты яичников для анализа включения BrdU фиксировали в 4% параформальдегиде.Затем парафиновые срезы депарафинизировали и гидратировали с последующей денатурацией 2 М HCl в течение 30 минут при комнатной температуре и нейтрализацией 0,1 М тетраборатом натрия в течение 10 минут. Затем слайды инкубировали с мышиным поликлональным антителом против BrdU (1: 200, G3G4, Abcam, Кембридж, Великобритания) в качестве первичного антитела, а затем с меченным TRITC козьим антимышиным IgG в качестве вторичного антитела. Затем срезы контрастировали с помощью DAPI, и установленные слайды визуализировали с помощью конфокального микроскопа (FV1000, Olympus, Токио, Япония).Количество BrdU-положительных и общее количество клеток яичника подсчитывали в максимальном поперечном сечении и выражали как процент клеток, меченных BrdU, к общему количеству клеток яичника (индекс BrdU).

TUNEL Assay

Срезы яичников инкубировали с реагентами с использованием набора для маркировки ник-концов дезоксиуридинтрифосфата, опосредованного терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазой (TUNEL, Vazyme, Nanjing), в соответствии с инструкциями производителя. Срезы визуализировали с помощью конфокального микроскопа (FV1000, Olympus, Токио, Япония), и количество TUNEL-положительных и общих овариальных клеток подсчитывали в максимальном поперечном сечении и выражали как процент клеток яичников, меченных TUNEL, к общему количеству яичников. клетки.

In situ Гибридизация

Специфические праймеры, использованные для получения меченных дигоксигенином зондов для обнаружения мРНК SCF , были: 5′-AATCTCCCAAATGATTATCTGATAACCCTTAAATA-3 ‘и 5′-GATAAGAACGACTGCATTATGCCTTCAACTGTAGA-3’. Для гибридизации in situ срезы тканей (толщиной 6 мкм) депарафинизировали и повышали проницаемость с помощью 4 мг / мл пепсина, разбавленного 3% цитратом, в течение 2 минут при 37 ° C с последующей инкубацией с гибридизационным буфером, содержащим меченые дигоксигенином зонды для 12 ч.Затем срезы проявляли, как описано в протоколе производителя (Boster Bioengineering Co., Ltd., Ухань, Китай), и окрашивали гематоксилином. Отрицательный контроль готовили таким же образом, за исключением того, что первичное антитело заменяли нормальной сывороткой.

Экстракция РНК и qRT-PCR

Суммарную РНК экстрагировали из яичников или клеток с использованием реагента Trizol (Invitrogen Co., Carlsbad, CA, USA). КДНК генерировали с 2 мкг общей РНК с использованием системы синтеза первой цепи SuperScript (Fermantas, Glen Burnie, MD) на основе протокола производителя.Количественную ПЦР в реальном времени (qPCR) использовали для оценки экспрессии FSHR, SCF / KITL, c-KIT , гена гомеобокса яичников новорожденного ( Nobox ), TBP-ассоциированного фактора 4b ( TAF4b ). qPCR проводили в трех экземплярах с использованием SYBR Premix Ex Taq ™ (TaKaRa Bio Inc., Япония) в системе обнаружения ПЦР в реальном времени CFX96 (Bio-Rad, США). После нормализации с помощью глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы ( GAPDH ) относительные уровни экспрессии мРНК в образцах были рассчитаны с использованием метода сравнительного порогового цикла.Метод дельта-дельта CT использовался для расчета значений относительного кратного изменения между образцами (4). Последовательности праймеров для ПЦР-анализа перечислены в таблице 2.

Таблица 2 . Праймеры для ПЦР-анализа.

Вестерн-блоттинг

Левый яичник гомогенизировали с использованием буфера для лизиса RIPA и 1 мМ PMSF (Beyotime, Нанкин, Китай). Белки разделяли электрофорезом в 10% SDS-полиакриламидном геле и переносили на PVDF-мембрану.Мембрану инкубировали в 5% сухом обезжиренном молоке при комнатной температуре в течение 1 ч, а затем инкубировали в течение ночи при 4 ° C с соответствующими первичными антителами, включая мышиные анти-PCNA (1: 500, Abcam, Кембридж, Великобритания), кроличьи анти-c- KIT (1: 100, Boster, Ухань, Китай), кроличий анти-FSHR (1: 500, ABclonal technology, Ухань), кроличий анти-Akt и фосфо-Akt (1: 200, Cell Signaling Technology, Массачусетс, США), кроличьи анти-MAPK1 (1: 100, Boster, Ухань, Китай) и фосфо-MAPK1 / 3 (1: 500, Novus Biologicals, Литтлтон, США), кроличьи анти-CDK2 (1: 200, Boster, Ухань, Китай), кроличьи анти-CCND1 (1: 200, Boster, Ухань, Китай), кроличьи анти-E-кадгерины (1: 100, Boster, Ухань, Китай), кроличьи анти-N-кадгерины (1: 200, Novus Biologicals, Littleton, США), кроличьи антитела против каспазы-3 (1: 100, Abcam, Кембридж, Великобритания) и кроличьи антитела против β-катенина (1: 200, DSHB, Айова-Сити, США) соответственно.Затем мембраны инкубировали при 37 ° C с соответствующими вторичными антителами в течение 60 мин. Полосы β-актина использовали в качестве внутреннего контроля. Отрицательный контроль FSHR получали идентичным способом, за исключением того, что первичное антитело заменяли PBS. Для количественной оценки белка полосы на изображениях были оцифрованы и проанализированы с использованием программного обеспечения ImageJ (разработанного Национальными институтами здравоохранения, http://rsbweb.nih.gov/ij/).

Статистический анализ

Все данные были выражены как средние значения ± SEM и проанализированы с использованием SPSS 21.0 t -тест или односторонний дисперсионный анализ (ANOVA) с множественными диапазонными тестами Дункана. Графики были построены в GraphPad 6.0, и P <0,05 считалось статистически значимым различием.

Результаты

Экспрессия мРНК

FSHR, SCF и c-KIT в развивающихся куриных яичниках

Для определения коррелированных изменений экспрессии мРНК FSH, SCF и c-KIT во время критического периода разрушения кист зародышевой линии и образования примордиальных фолликулов с помощью иммунофлуоресценции определяли клеточную локализацию и паттерны экспрессии этих генов. in situ гибридизация, иммуногистохимия, qRT-PCR и вестерн-блоттинг.

Иммуноокрашивание FSHR было локализовано как на кистах зародышевых клеток, так и на примордиальных фолликулах в яичниках цыплят 6-дневного возраста (рис. 1A). Начиная с 6-го дня количество фолликулов в целом, примордиальных фолликулов и растущих фолликулов начало увеличиваться на 760,5%, 572,8% и 2579,9% (Рисунок 1B, * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001). Со 2-го по 3-й день количество мРНК FSHR значительно увеличилось и оставалось на высоком уровне на 4-й день в куриных яичниках, увеличившись на 191.4% (Рисунок 1C, * P <0,05, ** P <0,01). Это резкое увеличение мРНК FSHR появилось до обширного образования примордиальных фолликулов, которое происходит с 6 дня и далее. Между тем, иммуноокрашивание c-KIT было обнаружено на ооцитах в кистах, примордиальных фолликулах и на окружающих их соматических клетках (рис. 2А). Белок c-KIT значительно увеличился на 709,3% с 4-го по 5-й день, оставаясь на высоком уровне на 6-й день, а затем резко снизился в яичниках (рисунки 2B, C).Между тем, мРНК SCF была локализована на окружающих соматических клетках кисты зародышевых клеток и фолликулов в коре яичников курицы (рис. 3А). Экспрессия мРНК SCF в яичниках цыплят значительно увеличилась на 114,4% с 3-го по 4-й день, затем увеличилась на 289,6% до пикового уровня на 6-й день, а затем снизилась до гораздо более низкого уровня с 7-го по 9-й день ( Рисунок 3B, * P <0,05, ** P <0,01).

Рисунок 1 .Экспрессия мРНК FSHR значительно увеличивалась при начальном образовании примордиальных фолликулов курицы. (A) Клеточная локализация FSHR в яичниках цыплят 6-дневного возраста. FSHR (зеленый) присутствует как в кистах (стрелки на 1–3), так и в примордиальных фолликулах (наконечники стрелок на 4 и 6). Масштабные линейки (1–3): 30 мкм. Масштабная линейка (4–6): 20 мкм. Шкала отрицательного контроля (7–9): 30 мкм. DAPI (синий, 2 и 5) использовался для идентификации ядерной ДНК. (B) Изменения общего числа первичных и растущих фолликулов с 3 по 8 день. (C) Экспрессию мРНК FSHR измеряли с помощью qRT-PCR в яичниках цыплят с первого по девятый день. GAPDH использовали в качестве контроля для нормализации. T -тесты использовали для определения статистически значимых различий. Значения представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего для шести экспериментов. Звездочки указывают на значимые различия (* P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001).

Рисунок 2 . Изменения c-KIT при формировании примордиальных фолликулов.Окрашивание коричневым цветом указывает на c-KIT, стрелки и стрелки представляют собой соматические клетки и ооциты, соответственно, в яичниках цыплят 6-дневного возраста ( A -1, масштабная линейка: 50 мкм). Также прилагается увеличенное изображение ( A, -2 и 3, масштабная линейка: 10 мкм). Отрицательный контроль ( A, -4, масштабная линейка: 50 мкм). (B) Экспрессия c-KIT с помощью вестерн-блоттинга в яичниках цыплят от 3 до 8 дней, нормализованная по β-актину. (C) Анализ Грея показывает, что c-KIT значительно увеличился с 4 по 6 день. T -тесты использовали для определения статистически значимых различий. Значения представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего для шести экспериментов. Звездочки указывают на существенные различия (** P <0,01, *** P <0,001).

Рисунок 3 . Экспрессия мРНК SCF в яичниках цыплят. МРНК SCF показала окрашивание в цитоплазме клетки в результате гибридизации in situ и . (A) мРНК SCF была обнаружена в цитоплазме клеток яичников цыплят 6-дневного возраста.Стрелки и стрелки обозначают кисты и фолликулы соответственно. (B) Экспрессию мРНК SCF измеряли с помощью qRT-PCR в куриных яичниках с 1 по 9 день. GAPDH использовали в качестве контроля для нормализации. T -тесты использовали для определения статистически значимых различий. Значения представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего для шести экспериментов. Звездочки указывают на значимые различия (* P <0,05, ** P <0,01).

Формирование первичных фолликулов с усилением ФСГ и передача сигналов KIT

in vivo

Поскольку экспрессия мРНК FSHR значительно увеличилась в процессе сборки примордиальных фолликулов, мы обработали цыплят ФСГ in viv o и обнаружили, что количество примордиальных фолликулов значительно увеличилось после введения ФСГ.Это привело к увеличению общего количества фолликулов и примордиальных фолликулов на 146,2% и 152,8% (Рисунки 4A – C, * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001) . Между тем, лечение ФСГ значительно увеличивало экспрессию мРНК SCF и c-KIT в яичниках цыплят на 176,5 и 218,8% (рис. 4D, * P <0,05, ** P <0,01, * ** P <0,001). Мы проверили перекрестную реактивность антитела к FSHR с FSHR яичников курицы и мыши с помощью вестерн-блоттинга, включая положительный и отрицательный контроли на FSHR (рис. 5А).Лечение ФСГ показало заметную повышенную регуляцию его собственного рецептора (Фигуры 5B, C, * P <0,05). Уровень белка c-KIT был значительно увеличен на 77,1% после лечения ФСГ (Рисунки 5B, D, * P <0,05, ** P <0,01), где ФСГ также увеличивал соотношение p-AKT / AKT на 56,9% (Рисунки 5E, F, * P <0,05). Более того, ФСГ увеличивал соотношение p-MAPK / MAPK на 47,4% (Рисунки 5E, G, * P <0,05).

Рисунок 4 .Влияние лечения ФСГ на куриный фолликулогенез in vivo . (A, B) Морфология первичных и растущих фолликулов в яичниках цыплят 6 дней. Масштабная линейка: 20 мкм. Остриями стрелок и стрелками обозначены соматические клетки и ооциты соответственно. (C) Изменения количества первичных и растущих фолликулов после лечения ФСГ. (D) Экспрессию мРНК c-KIT и SCF измеряли с помощью qRT-PCR в яичниках 6-дневных цыплят после обработки ФСГ на 4 день. GAPDH использовали в качестве контроля нормализации. T -тесты использовали для определения статистически значимых различий. Значения представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего для шести экспериментов. Звездочки указывают на значимые различия (* P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001).

Рисунок 5 . Влияние лечения ФСГ на передачу сигналов KIT in vivo . (A) Вестерн-блоттинг и анализ серого положительного и отрицательного контролей FSHR в яичниках цыплят и мышей 6-дневного возраста.Вестерн-блоттинг и анализ серого цвета показывают, что ФСГ значительно способствовал экспрессии FSHR (B, C) , c-KIT (B, D) , p-AKT / AKT (E, F) , p-MAPK / MAPK (E, G) . T -тесты использовали для определения статистически значимых различий. Значения представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего для шести экспериментов. Звездочки указывают на значимые различия (* P <0,05, ** P <0,01).

SCF усиливает стимулирующее действие FSH на компоненты сигналов FSHR и KIT

Чтобы подтвердить реципрокный эффект передачи сигналов FSH и KIT, участвующих в формировании фолликулов, культивируемые фрагменты яичников обрабатывали SCF и FSH по отдельности или в комбинации.Результаты показали, что обработка либо ФСГ, либо SCF увеличивала экспрессию белка c-KIT. Вместе ФСГ и SCF показали взаимный эффект на повышение экспрессии c-KIT на 99,1% (Рисунки 6A, B, * P <0,05, ** P <0,01). ФСГ и СКФ также проявляли сходный реципрокный эффект как на уровень белка ФСГР, так и на уровни мРНК, что приводило к увеличению экспрессии обоих из них после комбинированного лечения на 189,3 и 217,7% (Рисунки 6A, B, E, * P <0,05, ** P <0.01, *** P <0,001). ФСГ и SCF заметно увеличивали отношения p-AKT / AKT на 89,0–233,2%, p-MAPK / MAPK на 88,1–250,8%, отдельно или в комбинации (Рисунки 6A, C, D, * P <0,05, * * P <0,01).

Рисунок 6 . SCF усиливал стимулирующий эффект ФСГ in vitro . 4-дневные куриные яичники обрабатывали ФСГ и SCF в течение 2 дней в культуре. (A, B) Вестерн-блоттинг и анализ серого показывают, что SCF усиливает действие FSH на стимулирование экспрессии белков c-KIT и FSHR. (E) Анализ qRT-PCR показывает, что SCF может усиливать эффект FSH, способствуя экспрессии мРНК FSHR. Вестерн-блоттинг и анализ серого цвета показывают, что SCF может усиливать эффект ФСГ, увеличивая соотношение p-AKT / AKT (A, C) и соотношение p-MAPK / MAPK (A, D) . (F) FSH также в сочетании с SCF для стимулирования экспрессии мРНК TAF4b и Nobox . T -тесты использовали для определения статистически значимых различий. Значения представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего для шести экспериментов.Звездочки указывают на значимые различия (* P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001).

Хотя обработка культивированных яичников только ФСГ или SCF не привела к обнаруживаемым различиям в экспрессии мРНК TAF4b и Nobox , комбинированная обработка ФСГ с помощью SCF значительно увеличила экспрессию этих двух генов на 101,0 и 136,4%. (Рисунок 6F, * P <0,05).

Нокдаун мРНК

c-KIT и SCF ослабил стимулирующий эффект ФСГ на передачу сигналов KIT

Для проверки интерактивного эффекта передачи сигналов FSH и KIT на процесс сборки примордиального фолликула, SCF и c-KIT siRNA были индивидуально разработаны для нацеливания и подавления экспрессии SCF и c-KIT в клетках яичников курицы.Культивируемые клетки яичников обрабатывали ФСГ с последующей трансфекцией миРНК в течение 24 часов. Результаты показали, что стимулированное ФСГ увеличение экспрессии мРНК SCF или c-KIT было значительно снижено на 94,1 и 97,0% при нокдауне мРНК SCF или c-KIT (Фигуры 7A, B, * P <0,05, ** P <0,01). Отношения p-AKT / AKT, p-MAPK / MAPK были снижены при нокдауне SCF на 46,9 и 29,7% (Рисунки 7C-E, * P <0.05), а также c-KIT на 44,3 и 45,4% (рисунки 7F – H, * P <0,05).

Рисунок 7 . Нокдаун мРНК SCF и c-KIT снижал стимулирующий эффект ФСГ на передачу сигналов KIT. (A, B) Клетки яичников трансфицировали в течение 24 часов с помощью siSCF или sic-KIT. Анализ qRT-PCR показывает, что siSCF или sic-KIT снижали стимулирующий эффект ФСГ на экспрессию мРНК SCF или c-KIT . (C – E) Вестерн-блоттинг и анализ серого цвета показывают, что siSCF снижает стимулирующий эффект ФСГ на соотношение p-AKT / AKT и p-MAPK / MAPK. (F – H) Обработка sic-KIT снижала стимулирующий эффект ФСГ на соотношение p-AKT / AKT и p-MAPK / MAPK. «SiNSC» означает управление без отключения звука. T -тесты использовали для определения статистически значимых различий. Значения представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего для шести экспериментов. Звездочки указывают на значимые различия (* P <0,05, ** P <0,01).

ФСГ увеличивает пролиферацию клеток яичников и белок N-кадгерин

in vivo

С помощью иммуногистохимии и вестерн-блоттинга мы прояснили молекулярный механизм ФСГ в стимулировании сборки примордиальных фолликулов, подтвердив пролиферацию клеток и экспрессию молекул клеточной адгезии в ооцитах и ​​соматических клетках, соответственно, после лечения ФСГ в течение 2 дней in vivo .Результаты показали, что обработка ФСГ увеличивала экспрессию CDK2 на 65,4% (Рисунки 8A, C, D) и CCND1 на 78,0% (Рисунки 8B-D) в соматических клетках и ооцитах (* P <0,05). Более того, лечение ФСГ увеличивало степень мечения BrdU на 120,0% в коре яичников и значительно способствовало экспрессии белка PCNA на 42,1% в яичниках цыплят (Рисунки 9A – D, * P <0,05, ** P <0,01) . Кроме того, E-кадгерин интенсивно экспрессировался на участках контакта ооцитов-ооцитов внутри кист в коре яичников курицы.Напротив, только несколько маркеров E-кадгерина можно было обнаружить в фолликулярных соматических клетках (вставка на рис. 10А). ФСГ снижал экспрессию E-кадгерина и его партнера β-катенина на 44,6 и 40,8% (рисунки 10C, D, * P <0,05, ** P <0,01). Другая молекула клеточной адгезии, N-кадгерин, интенсивно экспрессировалась в ооцитах или соматических клетках фолликулов, а слабая экспрессия N-кадгерина могла быть обнаружена на участках контакта ооцитов и ооцитов в кистах зародышевых клеток в коре яичников.Обработка ФСГ способствовала экспрессии белка N-кадгерина на 71,6% (вставка на фиг. 10B, c, d, *** P <0,001).

Рисунок 8 . Комбинированные эффекты ФСГ и SCF на экспрессию белков клеточного цикла CCND1 и CDK2. (A – D) 4-дневных цыплят лечили FSH in vivo . Коричневое окрашивание представляет собой иммуногистохимический антиген. (E, F) 4-дневные куриные яичники обрабатывали ФСГ или SCF в течение 2 дней in vitro . (A) Стрелки представляют собой ооциты, окрашенные антителом к ​​CDK2. (B) Стрелки и стрелки представляют ооциты и соматические клетки, окрашенные антителом против CCND1. (C, D) Вестерн-блоттинг и анализ серого цвета показывают, что ФСГ способствует экспрессии белков CDK2 и CCND1 in vivo . (E, F) Вестерн-блоттинг и анализ серого цвета показывают, что SCF усиливает действие ФСГ на стимулирование экспрессии белков CDK2 и CCND1 in vitro . T -тесты использовали для определения статистически значимых различий.Значения представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего для шести экспериментов. Звездочки указывают на значимые различия (* P <0,05, ** P <0,01). Масштабные линейки: 50 мкм.

Рисунок 9 . Комбинированные эффекты ФСГ и SCF на пролиферацию клеток. (A) Яичники цыплят на шестой день инкубировали в течение 6 часов с BrdU после обработки FSH in vivo . Стрелки представляют собой клетки яичников с маркером BrdU (красный) в коре яичников. DAPI (синий) представляет собой ядерную ДНК.Масштабная линейка: 20 мкм. (B) Процент BrdU-положительных клеток значительно увеличился после обработки ФСГ. (C, D) Вестерн-блоттинг и анализ серого цвета показывают, что ФСГ способствует экспрессии белка PCNA. (E) 4-дневные куриные яичники обрабатывали ФСГ или SCF in vitro в течение 3 дней. Стрелками обозначены ячейки с маркером BrdU (красный). DAPI (синий) представляет собой ядерную ДНК. Масштабная линейка: 30 мкм. (G) Процент BrdU-положительных клеток значительно увеличивался при сочетании обработки ФСГ и SCF. (F, H) SCF усиливал действие ФСГ, способствуя экспрессии белка PCNA. T -тесты использовали для определения статистически значимых различий. Значения представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего для шести экспериментов. Звездочки указывают на значимые различия (* P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001).

Рисунок 10 . Комбинированные эффекты ФСГ и SCF на экспрессию E-кадгерина и N-кадгерина. Четырехдневных цыплят лечили ФСГ в течение 2 дней in vivo .Коричневая окраска представляет собой иммуногистохимический антиген. ( A вставка) Стрелки и стрелки представляют участки контакта ооцит-ооцит и соматические клетки, окрашенные E-кадгерином, соответственно. (C, D) Вестерн-блоттинг и анализ серого показывают, что ФСГ ингибирует экспрессию E-кадгерина и его партнера β-катенина in vivo . ( B вставка) Стрелки и стрелки представляют ооциты и соматические клетки, окрашенные N-кадгерином, соответственно. (C, D) Вестерн-блоттинг и анализ серого показывают, что ФСГ способствует экспрессии белка N-кадгерина in vivo . (E – H) 4-дневные куриные яичники обрабатывали ФСГ и SCF в течение 2 дней in vitro . Вестерн-блоттинг и анализ серого цвета показывают, что SCF усиливает действие ФСГ на стимулирование экспрессии N-кадгерина in vitro . Между тем, SCF усиливал ингибирующий эффект ФСГ на экспрессию E-кадгерина и β-катенина. T -тесты использовали для определения статистически значимых различий. Значения представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего для шести экспериментов. Звездочки указывают на существенные различия (* P <0.05, ** P <0,01). Масштабные линейки: вставка (A, B) , 10 мкм.

SCF усилил стимулирующее действие ФСГ на формирование первичных фолликулов

Для подтверждения интерактивного действия ФСГ и SCF, способствующего сборке примордиальных фолликулов, фрагменты яичников обрабатывали ФСГ и SCF in vitro . SCF дополнительно усилил стимулирующий эффект ФСГ на экспрессию CDK2 и CCND1 на 45,0 и 41,4% (Рисунки 8E, F, * P <0,05, ** P <0.01) взаимным образом. Такой реципрокный эффект был также обнаружен в действии ФСГ на пролиферацию клеток яичников (представленное включением BrdU) и экспрессию белка PCNA в культивируемых яичниках, которая увеличилась на 84,5 и 51,4% (Рисунки 9E-H, * P < 0,05, ** P <0,01, *** P <0,001). Более того, обработка культивированных фрагментов яичников комбинацией FSH и SCF продемонстрировала, что SCF усиливает ингибирующий эффект FSH на экспрессию E-cadherin или β-catenin белка на 43.5 и 26,2% (рисунки 10E – G, * P <0,05, ** P <0,01), но усилили стимулирующий эффект ФСГ на экспрессию N-кадгерина на 42,5% (рисунки 1E, H, * P <0,05, ** P <0,01).

Кроме того, обработка либо ФСГ, либо SCF ингибировала апоптоз клеток яичников (по оценке количества TUNEL-положительных клеток) на 50,7 или 54,3% в культивируемых фрагментах яичников (Фигуры 11A, B, * P <0,05, * * P <0.01, *** P <0,001). Усиливающий эффект ингибирования апоптоза клеток был достигнут за счет комбинированного лечения ФСГ и SCF. Клетки, положительные по метке каспазы-3 (маркер апоптоза), увеличились в ооцитах из разрушенных цист зародышевых клеток (фигура 11C). Вестерн-блоттинг показал, что совместное лечение ФСГ и SCF привело к значительному эффекту ингибирования экспрессии белка каспазы-3 на 77,8% (Фигуры 11D, E, * P <0,05, ** P <0,01).

Рисунок 11 .Комбинированные эффекты ФСГ и SCF на апоптоз клеток. (A) Клетки яичников (стрелки) с маркером TUNEL (зеленый) указывают на апоптоз клеток после обработки 4-дневных куриных яичников ФСГ или SCF in vitro в течение 3 дней. DAPI (синий) представляет собой ядерную ДНК. Масштабная линейка: 30 мкм. (B) Процент TUNEL-положительных клеток значительно снизился после обработки ФСГ и SCF. (C) Белок каспазы-3 обозначен коричневым пятном. Стрелками обозначены клетки яичников, окрашенные маркером каспасед-3. (D, E) Вестерн-блоттинг и анализ серого цвета показывают, что ФСГ ингибирует экспрессию белка каспазы-3. SCF усиливает действие ФСГ на ингибирование экспрессии каспазы-3 in vitro . T -тесты использовали для определения статистически значимых различий. Значения представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего для шести экспериментов. Звездочки указывают на значимые различия (* P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001).

Обсуждение

У млекопитающих передача сигналов FSH и KIT важна для образования примордиальных фолликулов (8, 15).Было показано, что у хомяков FSH способен стимулировать сборку примордиальных фолликулов посредством FSHR, чтобы регулировать клеточные адгезии и продукцию SCF (12, 25). Однако имеется мало доказательств, демонстрирующих эффекты передачи сигналов FSH и KIT на сборку примордиальных фолликулов у видов птиц. Взаимодействие между передачей сигналов FSH и KIT у цыплят также остается неясным. Здесь результаты лечения цыплят ФСГ и SCF in vivo и in vitro показали, что ФСГ может способствовать сборке примордиальных фолликулов посредством передачи сигналов KIT, и что SCF усиливает стимулирующий эффект ФСГ, способствуя пролиферации клеток и экспрессии белки клеточного цикла CCND1, CDK2 и E-кадгерин, но также действуют, подавляя апоптоз клеток и экспрессию N-кадгерина у кур.

Было показано, что

FSHR и SCF / c-KIT оказывают положительное влияние на формирование примордиальных фолликулов у млекопитающих (15, 25). Наши результаты, исследующие пространственно-временную экспрессию FSHR, SCF и c-KIT, показали, что они имеют сходные временные точки максимальной экспрессии, что предполагает, что комбинация этих факторов может иметь решающее значение для образования примордиальных фолликулов в коре яичников курицы.

Было отмечено, что

ФСГ способствует образованию примордиальных фолликулов у мышей и хомяков (11, 12, 22, 25, 26).Путем определения характера экспрессии мРНК FSHR на ранней стадии развития цыплят мы обнаружили обширное образование примордиальных фолликулов, появившихся через 2-3 дня после резкого увеличения количества мРНК FSHR. Обработка цыплят ФСГ in vivo показала, что ФСГ способствует сборке примордиальных фолликулов. Наше исследование также показало, что стимулирующее действие ФСГ на сборку примордиальных фолликулов, вероятно, будет взаимодействовать с передачей сигналов KIT. Изменения мРНК SCF и c-KIT соответствовали образованию примордиальных фолликулов.Следовательно, связывание SCF с его рецептором c-KIT может быть реципрокным фактором для ФСГ, способствующим сборке примордиального фолликула после связывания ФСГ с его рецептором. Предыдущие исследования показали, что передача сигналов AKT и MAPK может регулировать образование примордиальных фолликулов. Следовательно, AKT и MAPK представляют собой связь действия ФСГ с продвижением сборки примордиального фолликула. Кроме того, наши результаты показали, что ФСГ способствует сборке примордиальных фолликулов посредством передачи сигналов KIT, и что SCF может повышать чувствительность клеток яичников к стимуляции ФСГ за счет увеличения экспрессии ФСГ.

Известно, что множественные гормоны регулируют нормальное развитие примордиальных фолликулов при правильной координации сигнальных путей, факторов транскрипции и репрессии транспозонов (8, 27). Пролиферация соматических клеток и изменение экспрессии молекул клеточной адгезии играют важную роль в сборке примордиальных фолликулов (22). В этом исследовании мы обнаружили, что ФСГ способствует образованию примордиальных фолликулов, способствуя пролиферации клеток яичников и ингибируя апоптоз клеток, увеличивая экспрессию белков клеточного цикла, включая CCND1 и CDK2, которые необходимы для митоза и мейоза.Активность CDK2 важна для перехода от первого ко второму мейозу в ооцитах свиней и необходима для завершения профазы I мейотического клеточного цикла (28-30). Результаты текущего исследования показывают, что ФСГ может способствовать сборке примордиальных фолликулов и что это происходит вместе с различными эффектами на экспрессию белков внеклеточного матрикса (ЕСМ). Следовательно, сборка примордиальных фолликулов может сопровождаться вариациями пролиферации клеток, клеточного цикла и клеточной адгезии у видов птиц.

Помимо изменений в экспрессии белков клеточного цикла, факторы транскрипции TAF4b и Nobox также были отмечены как решающие для сборки примордиальных фолликулов (31). Было показано, что ФСГ может способствовать сборке примордиальных фолликулов посредством регуляции TAF4b и Nobox (8, 31). Такие исследования также показали, что FSH и SCF могут регулировать сборку примордиальных фолликулов реципрокным образом на уровне факторов транскрипции. Вышеупомянутые результаты обобщены на Рисунке 12.

Рисунок 12 .Схематическая иллюстрация передачи сигналов FSH и KIT в стимулировании сборки примордиальных фолликулов у курицы. ФСГ стимулировал образование примордиальных фолликулов, а передача сигналов KIT увеличивала чувствительность ФСГР к ФСГ посредством внутриклеточной передачи сигнала. В процессе образования примордиальных фолликулов у кур FSH взаимодействовал с SCF реципрокно, способствуя пролиферации клеток, экспрессии N-кадгерина и факторов транскрипции, но также действовал, ингибируя E-кадгерин / β-катенин и апоптоз клеток.

В заключение, FSH может способствовать образованию примордиальных фолликулов посредством передачи сигналов KIT. В свою очередь, передача сигналов KIT может повышать чувствительность FSHR к FSH посредством внутриклеточной передачи сигнала. В процессе образования примордиальных фолликулов у курицы ФСГ взаимодействует с SCF реципрокно, чтобы ускорить пролиферацию клеток, экспрессию N-кадгерина и подавить апоптоз клеток и экспрессию E-кадгерина через пути передачи сигналов AKT и MAPK.

Взносы авторов

CG, GL, DZ, YM, CZ и JL разработали эксперимент (ы).CG, GL и DZ проводили эксперименты; все авторы присоединились к анализу и интерпретации данных. CG, GL, CZ и JL подготовили рукопись. Все авторы рецензировали рукопись.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Это исследование было поддержано Национальным фондом естественных наук Китая (Nos.31772693, 31472160 и 31272525). Мы благодарны Weidong Zeng за помощь в экспериментах, доктору Hengyu Fan за предоставленный человеческий гетеродимер FSH-Fc / Fc и доктору Chris Wood (Университет Чжэцзян) за улучшение английского языка в рукописи.

Список литературы

1. Фэдди MJ, Gosden RG, Gougeon A, Richardson SJ, Nelson JF. Ускоренное исчезновение фолликулов яичников в среднем возрасте: значение для прогноза менопаузы. Hum Reprod. (1992) 7: 1342–6. DOI: 10.1093 / oxfordjournals.humrep.a137570

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

2. Ню В., Ван И, Ван З, Синь Ц., Ван И, Фенг Л. и др. Передача сигналов JNK регулирует соединения E-кадгерина в кистах зародышевой линии и определяет образование примордиальных фолликулов у мышей. Разработка (2016) 143: 1778–87. DOI: 10.1242 / dev.132175

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

3. Teng Z, Wang C, Wang Y, Huang K, Xiang X, Niu W. и др. S100A8, хемокин, специфичный для ооцитов, управляет миграцией соматических клеток яичников во время сборки примордиальных фолликулов мыши. J. Cell Physiol. (2015) 230: 2998–3008. DOI: 10.1002 / jcp.25032

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

4. He B, Mi Y, Zhang C. Гонадотропины регулируют решение митоза / мейоза зародышевых клеток яичников у эмбриональных цыплят. Mol Cell Endocrinol. (2013) 370: 32–41. DOI: 10.1016 / j.mce.2013.02.010

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

5. Чжан Х., Чжэн В., Шен Й, Адхикари Д., Адхикари Д., Уэно Х и др.Экспериментальные доказательства, показывающие, что в постнатальных яичниках мышей не существует митотически активных предшественников женской зародышевой линии. Proc Natl Acad Sci USA. (2012) 109: 12580–5. DOI: 10.1073 / pnas.1206600109

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

6. Чжан Х., Лю Л., Ли Х, Бусаяваласа К., Шен Й, Ховатта О. и др. Прижизненное отслеживание линий in vivo показывает, что оогенез не происходит от предполагаемых стволовых клеток зародышевой линии у взрослых мышей. Proc Natl Acad Sci USA. (2014) 111: 17983–8. DOI: 10.1073 / pnas.1421047111

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

7. Чен Й, Джефферсон В. Н., Ньюболд Р. Р., Падилья-Бэнкс Е., Пеплинг М. Э. Эстрадиол, прогестерон и генистеин ингибируют распад ооцитов и сборку примордиальных фолликулов в яичнике новорожденных мышей in vitro и in vivo . Эндокринология (2007) 148: 3580–90. DOI: 10.1210 / en.2007-0088

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

9.Knapczyk-Stwora K, Grzesiak M, Ciereszko RE, Czaja E, Koziorowski M, Slomczynska M. Влияние агонистов и антагонистов половых стероидов на фолликулогенез в яичнике новорожденных свиней через пролиферацию клеток и апоптоз. Териогенология (2018) 113: 19–26. DOI: 10.1016 / j.theriogenology.2018.02.008

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

10. Агиар Флорида, Лунарди Ф.О., Лима Л.Ф., Роча Р.М., Бруно Дж.Б., Магалхаес-Падилья Д.М. и др. Добавление ФСГ в культуральную среду полезно для активации и выживания преантральных фолликулов, заключенных в ткани яичников лошади. Териогенология (2016) 85: 1106–12. DOI: 10.1016 / j.theriogenology.2015.11.022

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

11. Ван Дж, Рой СК. Фактор дифференцировки роста-9 и фактор стволовых клеток способствуют образованию примордиальных фолликулов у хомяка: модуляция фолликулостимулирующим гормоном. Biol Reprod. (2004) 70: 577–85. DOI: 10.1095 / биолрепрод.103.023234

CrossRef Полный текст | Google Scholar

12. Ван Ц., Чжоу Б., Ся Г.Механизмы, контролирующие разрушение кисты зародышевой линии и образование примордиальных фолликулов. Cell Mol Life Sci (2017) 74: 2547–66. DOI: 10.1007 / s00018-017-2480-6

CrossRef Полный текст | Google Scholar

13. Тепекой Ф., Аккоюнлу Г. Влияние ФСГ и активина А на фосфорилирование Akt и MAPK1 / 3 в культивируемых полосках коры яичников крупного рогатого скота. J Ovarian Res. (2016) 9:13. DOI: 10.1186 / s13048-016-0222-2

CrossRef Полный текст | Google Scholar

14.Моннио Д. Управление фолликулогенезом посредством диалога ооцит-соматические клетки: уроки генетических моделей. Териогенология (2016) 86: 41–53. DOI: 10.1016 / j.theriogenology.2016.04.017

CrossRef Полный текст | Google Scholar

15. Джонс Р.Л., Пеплинг М.Э. Передача сигналов KIT регулирует образование примордиальных фолликулов в яичнике новорожденных мышей. Dev Biol. (2013) 382: 186–97. DOI: 10.1016 / j.ydbio.2013.06.030

CrossRef Полный текст | Google Scholar

16.Чжао И, Чжан И, Ли Дж, Чжэн Н, Сюй Х, Ян Дж и др. MAPK3 / 1 участвует в активации примордиальных фолликулов посредством передачи сигналов mTORC1-KITL. J. Cell Physiol. (2018) 233: 226–37. DOI: 10.1002 / jcp.25868

CrossRef Полный текст | Google Scholar

17. Казарини Л., Риччетти Л., Де Паскали Ф., Николи А., Тальявини С., Тренти Т. и др. Фолликулостимулирующий гормон усиливает стероидогенную активность хорионического гонадотропина и антиапоптотическую активность лютеинизирующего гормона в гранулезо-лютеиновых клетках человека in vitro . Mol Cell Endocrinol. (2016) 422: 103–14. DOI: 10.1016 / j.mce.2015.12.008

CrossRef Полный текст | Google Scholar

18. Li J, Zhao D, Guo C, Li J, Mi Y, Zhang C. Участие передачи сигналов Notch в раннем развитии фолликулов яичников цыплят. Cell Biol Int. (2015) 40: 65–73. DOI: 10.1002 / cbin.10538

CrossRef Полный текст | Google Scholar

19. Чжан Дж., Лю В., Сунь Х, Конг Ф., Чжу Й., Лей Й и др. Ингибирование сигнального пути mTOR задерживает образование фолликулов у мышей. J. Cell Physiol. (2016) 232: 585–95. DOI: 10.1002 / jcp.25456

CrossRef Полный текст | Google Scholar

20. Сюэ А.Дж., Кавамура К., Ченг Й., Фаузер, Британская Колумбия. Внутриовариальный контроль раннего фолликулогенеза. Endocr Rev. (2015) 36: 1–24. DOI: 10.1210 / er.2014-1020

CrossRef Полный текст | Google Scholar

21. Kibschull M, Gellhaus A, Carette D, Segretain D, Pointis G, Gilleron J. Физиологические роли коннексинов и паннексинов в репродуктивных органах. Cell Mol Life Sci. (2015) 72: 2879–98. DOI: 10.1007 / s00018-015-1965-4

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

22. Ван Ц., Рой СК. Экспрессия E-кадгерина и N-кадгерина в перинатальном яичнике хомячка: возможное участие в формировании примордиальных фолликулов и регуляции фолликулостимулирующим гормоном. Эндокринология (2010) 151: 2319–30. DOI: 10.1210 / en.2009-1489

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

23.Чжан Ю.Л., Го К.П., Цзи С.Ю., Лю XM, Ван П., Ву Дж. И др. Разработка и характеристика нового рекомбинантного агониста фолликулостимулирующего гормона длительного действия путем слияния Fc с субъединицей ФСГ-бета. Hum Reprod. (2016) 31: 169–82. DOI: 10.1093 / humrep / dev295

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

25. Лей Л., Джин С., Майо К.Э., Вудрафф Т.К. Взаимодействие между стимулирующим действием фолликулостимулирующего гормона и ингибирующим действием эстрогена на примордиальный фолликулогенез у мышей. Biol Reprod. (2010) 82: 13–22. DOI: 10.1095 / биолрепрод.109.077404

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

28. Ортега С., Прието И., Одадзима Дж., Мартин А., Дубус П., Сотилло Р. и др. Циклинзависимая киназа 2 необходима для мейоза, но не для деления митотических клеток у мышей. Nat Genet. (2003) 35: 25–31. DOI: 10.1038 / ng1232

CrossRef Полный текст | Google Scholar

30. Кэннон Д.Д., Чериан-Шоу М., Лавекамп-Свон Т., Чаффин К.Л.Экспрессия в клетках гранулез циклинов фазы G1 / S и циклин-зависимых киназ при росте фолликулов, индуцированном PMSG. Mol Cell Endocrinol. (2007) 264: 6–15. DOI: 10.1016 / j.mce.2006.09.015

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

вопросов обслуживания | Лодки Yamaha

ЗАЩИТА ОТ ЭЛЕМЕНТОВ

В то время как ваш дилер Yamaha может помочь вам или даже выполнить большую часть вашего общего и профилактического обслуживания, уменьшение коррозии — это то, что вы можете сделать только сами, а время имеет существенное значение.

Независимо от того, где вы плывете, коррозия поражает как внутреннюю, так и внешнюю часть вашей лодки — каждый день, постоянно. Некоторые формы вы можете видеть, некоторые — нет, и нанесение ущерба может занять совсем немного времени. Даже те, кто катается на лодке по пресной воде, должны уделять внимание предотвращению коррозии. Ведь даже дождевая вода может иметь коррозионное воздействие, которое может нанести вред вашей лодке. Поэтому очень важно проявлять усердие в защите от коррозии.

Ваш дилер может помочь предоставить подходящие продукты для предотвращения некоторых форм коррозии, но их регулярное и старательное использование зависит исключительно от вас.Ниже приведены ответы на общие вопросы о том, как уменьшить наличие и повреждение коррозии.

Где мне нужно сосредоточить свою борьбу с коррозией?

Коррозия может произойти практически где угодно на вашей лодке или внутри: внутри, в вашей топливной системе или во внутренних каналах охлаждающей воды, а также снаружи, в различных электрических соединениях и открытых металлических компонентах. Но не волнуйтесь, на вашей стороне много союзников, и мы здесь, чтобы помочь, научив вас, где искать и что искать.

Что такого важного в промывке лодки? I лодка исключительно для пресной воды; мне все еще нужно?

Ваша лодка Yamaha охлаждается неочищенной водой, что означает, что она использует воду, на которой работает, в качестве охлаждающей воды. Вся вода, пресная или соленая, содержит загрязняющие вещества, которые со временем будут накапливаться в охлаждающих каналах. Кроме того, соленая вода по своей природе является коррозийной, и любая, оставшаяся в этих каналах охлаждающей воды после использования, остается там, чтобы делать все возможное, не ослабевая.Морская вода также может кристаллизоваться при нагревании выше 170 градусов, что вызывает образование отложений и потенциально ограничивает проходы охлаждающей воды. По этим причинам необходимо тщательно промывать двигатель свежей чистой водой после каждого использования.

Как мне промыть лодку?

Используйте этот основной метод для промывки после каждой поездки.

• Вынув лодку из воды, подсоедините переходник садового шланга к садовому шлангу.
• Ослабьте колпачок соединителя промывочного шланга и снимите его. Вставьте переходник садового шланга в соединитель промывочного шланга, нажимая и поворачивая его, пока он не будет надежно подсоединен.
• Подсоедините садовый шланг к водопроводному крану.
• Убедитесь, что вокруг лодки свободно, а затем запустите двигатель. Сразу после запуска двигателя полностью включите подачу воды, чтобы вода непрерывно выходила из сопла реактивного двигателя и выходного патрубка охлаждающей воды.

Примечание: Никогда не включайте воду перед запуском двигателя.Вода может стекать обратно через глушитель в картер, вызывая серьезные повреждения двигателя. Обязательно включайте воду сразу после запуска двигателя, чтобы предотвратить его перегрев.

• Дайте двигателю поработать на высоких холостых оборотах примерно от 3 до 5 минут. Если двигатель останавливается во время промывки, немедленно отключите подачу воды, повторите предыдущий шаг и продолжайте.
• Выключите подачу воды. Слейте остаточную воду из выхлопной системы, поочередно нажимая рычаг дистанционного управления на половину дроссельной заслонки и обратно на холостой ход на 10–15 секунд.
• Остановите двигатель.

Примечание: Никогда не оставляйте воду, когда двигатель не работает. Вода может стекать обратно через глушитель в картер, вызывая серьезные повреждения двигателя. Не запускайте двигатель более 15 секунд после отключения подачи воды, чтобы избежать его перегрева.

• Снимите переходник садового шланга.
• Установите и надежно затяните крышку.

Что такое «сухая коррозия»? Что вызывает это и что я могу с этим поделать?

Сухая коррозия возникает в местах, не находящихся в непосредственном контакте с водой, например, в выхлопных системах.Снаружи большинство компонентов выхлопной системы охлаждается сырой водой для предотвращения перегрева. При сжигании современного топлива с повышенным содержанием этанола образуются побочные продукты, известные как сульфатные соли. Эти соли очень агрессивны, особенно при воздействии очень высоких температур. Если каналы охлаждающей воды на лодке не поддерживаются в чистоте с помощью регулярной промывки (выхлопная зона в этом примере), на внутренней части выхлопных компонентов могут образоваться горячие точки, концентрируя коррозионное воздействие сульфатных солей. Результат — коррозия изнутри.Вот почему промывка двигателя свежей чистой водой в течение 3 минут после каждой поездки является жизненно важной частью предотвращения даже сухой коррозии. Он помогает системе охлаждения работать с максимальной эффективностью, поддерживая чистоту и прозрачность каналов охлаждающей воды, что помогает минимизировать нагрев внутри двигателя, делая его менее подверженным сухой коррозии.

Как бороться с коррозией на внешней стороне лодки?

Хорошая практика — установить регулярный график и придерживаться его.Есть быстрые и простые вещи, которые вы должны делать после каждого использования, если вы плывете по соленой воде, и периодически, если вам нужна пресная вода. К ним относятся визуальные осмотры, которые вы должны делать каждый раз. Если вы не знаете, что делать и когда, официальный дилер Yamaha может вам помочь.

1. Промойте. Не щадите шланг, возвращаясь из поездки, особенно в соленой воде. Промойте лодку снаружи чистой водой. Протрите лодку снаружи мягким мылом и мягкой тканью.(Не используйте жидкую посуду для посуды, она может удалить важные защитные средства.) Идите и вымойте всю лодку и трейлер. Затем протрите его замшей хорошего качества, чтобы все выглядело остро.

Примечание: Если накопление соли стало проблемой или двигатель вашей лодки каким-то образом напрямую контактировал с соленой водой, можно осторожно промыть части двигателя чистой пресной водой для удаления соли и других загрязнений. Просто используйте шланг низкого давления, а не распылитель, и не ополаскивайте зону забора воздуха.Перед закрытием люка двигателя убедитесь, что двигатель полностью высох на воздухе.

2. Распылите. Обильно опрыскайте весь сухой двигатель защитным средством, таким как Yamashield ™. Это смазка, водоотталкивающее средство и антикоррозийное средство — все в одном лице. Здесь тоже хорошо работает качественный силиконовый спрей. Мы рекомендуем Yamashield для труднодоступных мест, поскольку он смывается водой, и силиконовый спрей для легкодоступных участков, так как он требует повторного нанесения ежемесячно, поскольку он рассасывается.Распылите опрыскивание на все внешние поверхности двигателя и электрические соединения, чтобы защитить их от коррозии.
3. Проверь. Выполняйте быстрый визуальный осмотр вашей лодки и струйных насосов каждый раз, когда вы их используете. Ищите что-нибудь необычное и исследуйте, если необходимо. Обратите особое внимание на:

Аноды: Аноды намеренно подвергаются коррозии раньше, чем ваш двигатель, чтобы защитить его. Более известные как «жертвенные аноды», они обычно имеют тускло-серый цвет.На лодках Yamaha они обычно расположены на корпусе водометного насоса или на водометном насосе или за его пределами. Поскольку со временем возникает коррозия, они начинают «растворяться». Заменяйте их, когда они разрядятся примерно на 50%, только качественными заменами, рекомендованными заводом-изготовителем. Не дайте себя обмануть некачественной имитацией. На карту поставлено слишком многое, чтобы рискнуть. Жертвенные аноды Yamaha изготовлены из смеси высококачественных сплавов, специально разработанных для защиты вашей лодки Yamaha.

Осторожно: Никогда не красите и не покрывайте аноды каким-либо образом, так как они должны находиться в прямом контакте с водой для правильной работы.Под воздействием воды (особенно пресной) они могут покрываться слоем органического нароста (часто называемого «пеной»). Часто он настолько тонкий, что вы этого даже не заметите, но он может помешать аноду выполнять свою работу. Поэтому во время обычной процедуры промывки обязательно подносите к анодам щетку и немного мыла, чтобы они оставались чистыми и находились в прямом контакте с водой. Это поможет им работать должным образом.

Электрические системы: Найдите электрические соединительные блоки под консолью и в трюмных зонах.Также проверьте клеммы аккумулятора. Если на любом из них появится коррозия, средство для очистки и защиты клемм аккумулятора Yamalube® сделает свое дело. Распылите его, чтобы очистить пораженные участки (сильно корродированные соединения сначала необходимо отсоединить и тщательно очистить). Когда он высыхает, он оставляет защитную восковую пленку, которая помогает предотвратить повторное образование коррозии.

Фильтры истории заданий — База знаний Cloud FastPath

Фильтры — это гибкий и эффективный способ извлечения интересующей информации из журналов передачи.Для анализа ошибок в журнале событий обычно лучше сначала выбрать тип ошибки из фильтра «Все состояния» в самом верху модального окна, например, ошибка чтения или ошибка записи. Затем вы можете использовать инструмент поиска, который находится справа от всех статусов, чтобы уточнить свой выбор. Инструмент поиска имеет полей , которые позволяют вам выбрать общий атрибут задания, такой как каталог или размер файла, и фильтры , например «Содержит», которые позволяют сузить поиск по всем путям до тех, которые содержат определенное подмножество этого атрибута, например пути, содержащие «Документы.’

Фильтры соответствий — это особый тип фильтров, которые используют регулярные выражения (regex) для выполнения составного поиска.

Все статусы:

Щелкните меню «Все статусы», чтобы выбрать тип ошибки, которую вы хотите проанализировать:

В списках меню будут включены только типы ошибок при выполнении конкретного задания. Вот некоторые из наиболее распространенных статусов, которые вы можете увидеть в списке:

• успешно: файл успешно передан.
• match-exists: исходный и целевой экземпляры файла или папки были идентичны, поэтому они не были перенесены.
• match-current: текущая версия в источнике совпадает с текущей версией в целевой, поэтому файл не был передан. Для заданий, в которых выбрана передача версии файла.
• ошибка чтения (не удалось прочитать файл в источнике) и ошибка записи (не удалось записать файл в целевой объект).
• source-missing: это просто означает, что в целевой папке был найден файл, которого не было в источнике.
• отфильтровано: файлы, такие как скрытые и системные файлы, по умолчанию не передаются; многие облачные провайдеры в любом случае исключают их.Если вы дополнительно настроили свою работу с фильтрами даты или другими фильтрами имен файлов, они также будут перечислены как отфильтрованные. Эти файлы не были переданы.
• удалено: файлы, которые были удалены из цели во время выполнения; для заданий, для которых выбрано зеркальное удаление.
• целевой-путь-отсутствует: файл или папка присутствовали в целевом объекте, но не в источнике, во время сканирования целевого объекта, и для задания было выбрано зеркальное удаление.Когда CFP вернулся, чтобы удалить элемент, его больше не было (предположительно из-за того, что пользователь удалил его между временем сканирования цели и моментом, когда CFP был готов к фактическому удалению элемента).
• превышен размер: размер файла больше, чем поддерживает целевой сервер.
• пакетная очередь: элемент успешно передан на уровень Azure клиента Microsoft, но CFP не получил подтверждения, что пакет успешно передан в конечный пункт назначения на SPO / OneDrive.Этот статус виден только в заданиях, для которых разделенных заданий миграции SPO выбрано в качестве расширенного параметра для целевого объекта SPO или OneDrive.
• match-future-time: время mtime файла в источнике находится в будущем, а время mtime в будущем (например, 01.08.2034) не поддерживается на целевом сервере. Когда это произойдет, CFP попытается сохранить файл на целевом компьютере при первом запуске с правильным временем mtime, но целевой объект преобразует это, как правило, во время сохранения файла на целевом компьютере. Когда CFP выполняет синхронизацию, файл обычно передается снова, потому что исходный файл новее, чем целевой, но CFP не передает файл и просто помечает его как соответствие времени будущего, пока размер остается таким же.В будущем может произойти загрузка файлов на серверы Windows с таких устройств, как старые сотовые телефоны.

Поисковые запросы:

Щелкните значок увеличительного стекла слева от меню «Все статусы», чтобы сузить список. В форме поиска есть два типа фильтров:

• Включить / исключить фильтры. Это «Содержит», «Совпадает», «Равно», «Существование» и их соответствующие фильтры исключения (не).
• Фильтры текстовой строки и регулярных выражений.Фильтры регулярных выражений используются только с фильтрами «Соответствует» и «Не совпадает».

Включить / исключить фильтры

Они позволяют дополнительно уточнить выбор до строки в имени пути к файлу или сообщению об ошибке.

CONTAINS: Возвращает все результаты, содержащие введенную строку. Если вы хотите вернуть все экземпляры каталога «Мои документы», введите / Мои документы в поле «Источник».

MATCHES: Возвращает все результаты, соответствующие введенному строковому выражению./] * Джонс в поле «Источник». Это будет искать строку «/ Kate», за которой следует 0 или более символов, не являющихся косой чертой (‘/’), за которой следует строка «Jones».

Чтобы вернуть все файлы gif и jpg, введите [.] Gif $ | [.] Jpg $ в поле «Источник».

EQUALS: возвращает точное совпадение всей строки. Это в первую очередь полезно, если вас интересует статус конкретного файла или экземпляры конкретной ошибки. Вы должны ввести полный путь и имя файла, чтобы получить совпадение.Если вы ищете файл / ksmith / My Documents / myFile.docx, это то, что вы вводите при использовании оценщика «Equals». Пути журналов передачи не включают целевой каталог. Для поиска конкретных ошибок фильтры «Содержит» и «Совпадения» обычно работают лучше, поскольку многие строки сообщений об ошибках будут включать такие данные, как имя файла и размер файла, которые относятся к файлу, который не был передан.

EXISTENCE: Предоставляет логический (истина / ложь) оператор, который в первую очередь полезен при использовании с другими фильтрами поиска.Например, если вы хотите найти все файлы в целевом объекте, которые не имеют расширений, вы можете ввести Целевое расширение не существует на вкладке «Целевой объект», а затем выбрать «Тип не является каталогом» на вкладке «Общие».

Поля в фильтрах истории заданий

Вкладки источника и цели

ИСТОЧНИК / ЦЕЛЬ: Поиск полного пути или фрагмента пути в источнике или цели.

ИСТОЧНИК / РАСШИРЕНИЕ ЦЕЛИ: Найдите все экземпляры определенного расширения файла в вашем задании.Введите расширение без точки в начале. Например, чтобы найти все файлы docx, введите docx.

ИСТОЧНИК / ЦЕЛЕВАЯ КАТЕГОРИЯ: Выберите тип файла. Поддерживаемые типы и возвращаемые файлы:

• АУДИО: a52, aac, ac3, aiff, au, aup, dts, flac, itdb, itl, m3u, m4a, m4b, m4r, mka, mp1, mp2, mp3, mpa, nra, ogg, rm, sfap0, spx, wav, wma, wmdb, wpk, wpl
• КОНФИГУРАЦИЯ : cf, cfg, conf, config, csf, icc, ini, properties, reg, setting, udl
• КОНТЕЙНЕР: 7z, 7zip, ace, arc, arj, b64, bkf, bz2, bza, c2d, cab, cdi, cpio, deb, dmg, enc, gca, gho, gz, gza, ha, img, imz , iso, ize, jar, lha, lzh, nrg, pak, pdi, pk3, rar, rpm, sit, tar, tbz, tgz, tz, uue, v2i, z, zip
• ДАННЫЕ: bqy, csv, dat, data, wab, xml
• ФАЙЛОВ БАЗЫ ДАННЫХ: accdb, accdc, accde, accdr, accdt, accdw, accft, db, dbf, fdb, ib, ldb, ldf, mdb, mdf, pdx, sdf, sql, sqlite
• ГРАФИЧЕСКИЕ ФАЙЛЫ: ai, ani, arw, b3d, bmp, cam, cdr, clp, cr2, crw, cur, dcm, dcr, dcx, dds, dib, djvu, dng, dwg, ecw, emd, emf, eps, fh20, fh21, fh6, fh7, fh8, fh9, fpx, fsh, g3, gif, icl, ico, iff, indd, iw44, j2k, jp2, jpc, jpe, jpeg, jpg, jpm, k25, kdc, lwf, mef, mng, mos, mrw, nef, ngg, nlm, nol, orf, pbm, pcd, pcx, pdn, pef, pgm, png, pnx, ppm, ps, psd, psp, qtif, raf, ras, raw, sff, sgi, skm, sr2, srf, svg, tga, tif, tiff, ufo, wbmp, wmf, xbm, xpm
• СПРАВОЧНЫЕ ФАЙЛЫ: aw, chm, cnt, gid, hlp, hxa, hxc, hxf, hxk, hxs, hxt, toc
• ИНТЕРНЕТ-ФАЙЛЫ: asmx, asp, aspx, cfm, cgi, css, htaccess, htm, html, htpassword, htt, js, mht, php, php5, shtml, url, ascx
• ПОЧТОВЫЕ ФАЙЛЫ: 0tx, edb, eml, emlx, msg, ndk, nsf, ntf, oft, olk, olm, ost, pst, rwz, wab, mbox
• ОФИСНЫЕ ФАЙЛЫ И ДОКУМЕНТЫ: 123, book, dic, doc, docm, docx, dot, dotm, dotx, fm, frx, lex, lwp, mde, mdt, mpp, mwp, nk2, odm, odp, odt, one, onebin, onecache, onepkg, onetoc, onetoc2, onetmp, pdf, pip, pot, potx, pps, ppt, pptm, pptx, pub, pwi, rtf, sam, thmx, vdx, vsd, vss, wks, wk1, wk2, wk3, wk4, xla, xlam, xlk, xlr, xls, xlsx, xlsm, xlsb, xlt, xltm, xltx, xlw
• ФАЙЛЫ ВИРТУАЛИЗАЦИИ ПК: vhd, vhdx, vfd, vmdk, vmem, vmsn, vmss, vmx, vsv, vud
• ФАЙЛЫ ПРОГРАММЫ: manifest, 8bf, bat, bpl, class, cmd, com, dll, exe, itxib, jar, lnk, mo, msc, mui, ocx, pm, rll, scr, so, vbx, x86, xpt
• ФАЙЛЫ РАЗРАБОТКИ ПРОГРАММНОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ: dbg, a, ahk, asm, bdsgroup, bml, bpg, bpi, bpk, bpr, c, cbl, cpp, cs, dcr, dcu, def, dess, dfm, dof, dpk, dpr , drc, dtd, elf, exp, fmx, frm, git, h, hg, hmx, hmxp, hpp, idl, inc, inl, ise, ism, iss, java, jsl, json, lib, lic, lpk, mak , map, mds, mk, ncp, nrmap, o, obj, pas, pch, pdb, pfx, pl, ps1, psd1, psm1, py, rc, rc2, rdl, res, resources, resx, rgs, scs, shfb , sln, snippet, src, suo, svn, swd, swt, target, tcl, tcLLP, tcScript, tlb, trx, tt, vb, vbp, vbs, vbw, vcproj, vcxproj, vsp, vsprops, vssettings, vstemplate, wsdl , wxl, wxs, xaml, xcodeproj, xdr, xfm, xsd, xsl
• СИСТЕМНЫЕ ФАЙЛЫ: adm, admx, afm, ax, cat, cdf-ms, cer, cpl, dmp, drv, ds_store, dxt, evt, evtx, fon, gpd, icm, inf, inf_loc, isp, man, ммм, mof, msi, msm, msp, msu, mum, nlp, nls, otf, pfb, pfm, pnf, ptxml, rbf, rdp, spc, sys, theme, ttc, ttf, vst, vxd, wer
• ВРЕМЕННЫЕ И РЕЗЕРВНЫЕ ФАЙЛЫ: -, $$$, bak, cache, chk, dmp, err, old, tmp
• ТЕКСТОВЫЕ ФАЙЛЫ: 1st, asc, latex, log, nfo, tex, txt
• ВИДЕОФАЙЛОВ: aif, ape, asf, avi, divx, dv, fla, flv, idx, ifo, m1v, m2ts, m2v, m4v, mid, midi, mkv, mov, mp4, mpeg, mpeg1, mpeg2, mpeg4, mpg, mpv, mts, ogm, ra, snd, srt, sub, swc, swf, ts, vob, wmv

ВЛАДЕЛЕЦ: найдите имя учетной записи владельца данных.Доступно только для заданий сопоставления учетных записей.

Вкладка «Общие»

ТИП: Это одна из самых популярных областей. У него есть два варианта: «Тип — это каталог» возвращает все пути, заканчивающиеся на каталоги, а «Тип — не каталог» возвращает все файлы. Поэтому, если вы хотите, чтобы в отчете о передаче отображались только файлы, выберите «Тип не каталог».

БАЙТОВ, ДАТА НАЧАЛА ПЕРЕДАЧИ, ДАТА ИЗМЕНЕНИЯ: Эти поля могут помочь вам сузить отчет о передаче до файлов определенного размера или диапазона дат.

СООБЩЕНИЕ: Это еще одно популярное поле, которое позволяет выявлять все ошибки в вашей работе. См. «Выявление всех типов ошибок в задании» ниже для получения дополнительной информации.

О связанных файлах

Связанные файлы, такие как .xlsx и другие файлы Office, имеют специальные функции отчетности, которые позволят вам увидеть пути, по которым связаны зависимые электронные таблицы.

• Теперь в отчетах о передаче есть фильтр, который позволяет фильтровать связанные файлы:

• Если вы выберете связанный файл в отчете о передаче, на панели «Подробности» появится вкладка «Ссылки», на которой будут перечислены файлы, связанные с текущим файлом.
В отчетах о передаче
• есть новый столбец для ссылок, в котором перечислены связанные входные данные для соответствующих файлов.
• Зашифрованные и защищенные паролем файлы не имеют доступного содержимого, и их ссылки не будут сообщаться.

Выявление всех типов ошибок в работе

В некоторых заданиях может быть большое количество одной ошибки и несколько других ошибок, которые все еще необходимо изолировать и устранить. Например, у вас могут быть сотни ошибок разрешений и несколько других файлов, которые не удалось передать по какой-либо другой причине.Чтобы определить все ошибки в задании, сделайте следующее:

1. Полезно выбрать класс ошибки, например, ошибка чтения, в меню «Все статусы».
2. Щелкните класс увеличения, чтобы вызвать окно поиска, и выберите «Не совпадает» в меню рядом с полем сообщения (вкладка «Общие») в поле поиска.
3. Введите наиболее частое полученное сообщение в поле Сообщение. Например, если в вашем журнале событий было много ошибок кода EPERM, вы можете просто ввести «EPERM.’Вы увидите результаты для всех файлов и каталогов, в которых НЕТ этой ошибки.
4. Щелкните любой из файлов / каталогов в списке, и вы увидите подробную информацию об этом файле в нижней части экрана. Найдите сообщение об ошибке для этого файла в поле Сообщение.
5. Добавьте ошибку в поле сообщения окна поиска, используя следующий формат: errorMessage1 | errorMessage2. Так, например, если ваша первая ошибка была EPERM, а ваше второе сообщение было «Сетевой путь не найден.”, Вы должны ввести EPERM | Сетевой путь не найден ..
6. Это либо вернет меньший набор файлов и каталогов, в которых нет ошибок, либо не вернет никаких результатов. Если он не возвращает результатов, вы знаете, что единственными ошибками в задании были две введенные вами ошибки.